[发明专利]一种血管瘤动物模型的建系方法有效
| 申请号： | 201410315187.4 | 申请日： | 2014-07-03 |
| 公开（公告）号： | CN104087615B | 公开（公告）日： | 2018-07-17 |
| 发明（设计）人： | 徐骎;谢芙蓉;余婧爽;陈万涛 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;A01K67/027 |
| 代理公司： | 上海精晟知识产权代理有限公司 31253 | 代理人： | 冯子玲 |
| 地址： | 200011 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种血管瘤动物模型的建系方法，包括：(1)血管内皮细胞特异表达的PyMT基因质粒的构建；(2)将上述构建好的质粒经PvuI酶切线性化，然后显微注射到小鼠受精卵中；(3)将出生的小鼠进行PCR鉴定，得到鉴定结果为阳性的转基因小鼠；所述的转基因小鼠出现血管瘤样表型；(4)将上述转基因小鼠作为培育转基因动物品系基础种群的首建鼠建立血管瘤动物模型。本发明中目的基因PyMT仅表达于血管内皮细胞中，避免了其在其他组织中诱导发生恶性肿瘤，模型动物表型专一，显示典型的血管瘤样改变；明显改善了PyMT基因的胚胎毒性，产生的阳性首建鼠的数量明显高于传统方法，可以稳定传代、建系，子代鼠也均有血管瘤表型。 | ||
| 搜索关键词： | 血管瘤 转基因小鼠 动物模型 表型 血管内皮细胞 构建 传代 培育转基因 小鼠受精卵 阳性首建鼠 动物品系 基因质粒 鉴定结果 模型动物 目的基因 胚胎毒性 特异表达 显微注射 线性化 子代鼠 恶性肿瘤 酶切 小鼠 质粒 诱导 种群 基因 | ||
【主权项】：
1.一种血管瘤动物模型的建系方法，包括：(1)血管内皮细胞特异表达的PyMT基因质粒的构建；所述质粒中包含血管内皮细胞特异表达的启动子Tie2、真核生物转录所需Kozak序列、PyMT基因全序列、SV40polyA信号和Tie2增强子序列；(2)将上述构建好的质粒经PvuI酶切线性化，回收7.0kb的DNA片段；然后将上述DNA片段注射到受精卵的雄原核中，再移植到0.5天假孕鼠的输卵管中，得小鼠；(3)将出生的小鼠进行PCR鉴定；(4)将步骤(3)鉴定后的转基因小鼠作为培育转基因动物品系基础种群的首建鼠建立血管瘤动物模型。
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