[发明专利]运动发酵单胞菌RecET重组系统表达质粒及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了6个用于运动发酵单胞菌的RecET重组系统表达质粒pSUZM1a-RecET(RecE588T)、pSUZM2a-RecET(RecE588T)、pSUZM3a-RecET(RecE588T)及其构建方法与应用。这6个表达质粒都包含卡那霉素筛选标记基因、组成型启动子Ppdc和RecET（或RecE588T）基因。其区别在于质粒pSUZM1a-RecET(RecE588T)包含运动发酵单胞菌染色体上复制起点oriC、质粒pSUZM2a-RecET(RecE588T)包含运动发酵单胞菌内源性质粒pZZM401上的复制蛋白序列、质粒pSUZM3a-RecET(RecE588T)包含运动发酵单胞菌内源性质粒pZZM402上的复制蛋白序列。把表达质粒转入Z. mobilis，在敲入的筛选标记基因同源臂为60bp时，敲入基因能够准确地替换靶基因。本发明的质粒具有很好的应用前景。

主权项

一类能在运动发酵单胞菌中应用RecET重组系统的表达质粒：pSUZM1a‑RecET、pSUZM2a‑RecET、pSUZM3a‑RecET，包含运动发酵单胞菌内源性基因启动子、筛选标记基因、recE和recT基因；以及表达质粒pSUZM1a‑RecE588T、pSUZM2a‑RecE588T、pSUZM3a‑RecE588T，包含运动发酵单胞菌内源性基因启动子、筛选标记基因、recE588 (recE基因编码其蛋白N端588个氨基酸的序列被删减，简称为recE588) 片段和recT基因。