[发明专利]一种孕酮人工抗原合成方法

摘要

一种孕酮人工抗原合成方法，属于生物化工技术领域。本发明利用孕酮类似物化合物Ⅰ上特有的羟基作为反应基团，和2‑溴乙酸反应得到孕酮半抗原，采用混合酸酐法将半抗原与载体蛋白BSA相连合成孕酮人工抗原或将半抗原与载体蛋白OVA相连合成包被原。本方法成功的合成孕酮人工抗原，合成过程简单，合成产物充分的暴露多种激素甾体环结构相同的部分，用于免疫分析中，可以得到群选性孕酮单克隆抗体，满足国家孕激素多重检测的需要。

主权项

一种孕酮人工抗原合成方法，其特征在于：以孕酮类似物化合物Ⅰ为原料，通过氢氧化钾和2‑溴乙酸进行取代，得到孕酮半抗原，然后利用混合酸酐法将其与载体蛋白BSA偶联，得到孕酮人工抗原；具体步骤为：（1）孕酮半抗原的制备：取化合物Ⅰ0.1mmol溶解于3mL无水二甲亚砜中，加入氢氧化钾粉末1.5mmol，充分溶解后溶液为淡黄色，命名为A液；取2‑溴乙酸0.2mmol充分溶解于1.4mL无水二甲亚砜中，缓慢的滴加到A液中，颜色逐渐变为深黄色，室温反应4h；用50mL冰水终止反应，乙酸乙酯萃取三遍，合并水相，将水相用2mol/L盐酸酸化得黄色沉淀，水洗四遍至中性，干燥后得到黄色孕酮半抗原P‑hapten粉末，产物溶解于甲醇后用LC‑MS鉴定；（2）孕酮人工抗原的制备：称取步骤（1）制备的孕酮半抗原0.01mmol，溶解于600μL无水N,N‑二甲基甲酰胺DMF中，置于4℃冰浴中搅拌，溶液预冷后加入0.025mmol三正丁胺，冰浴条件搅拌30min，加入0.025mmol氯甲酸异丁酯，继续冰浴搅拌2h，得活化后小分子溶液B液；称取载体蛋白BSA 0.00016mmol溶解于pH 9.6的碳酸盐缓冲液CBS中，得蛋白溶液；在冰浴条件下，将小分子溶液B液逐滴滴加到蛋白溶液中，反应8h；反应结束后，将溶液离心，取上清，即得到产品孕酮人工抗原混合液；将孕酮人工抗原混合液移入到透析袋中，用0.01M、pH7.4的磷酸盐缓冲液PBS中透析三天，6‑8h更换一次透析液，透析结束后取出孕酮人工抗原分装在1mL的无菌的离心管，在‑20℃保存，备用。