[发明专利]主要蚊媒病毒和寄生虫甄别检测基因芯片的制备和使用方法

摘要

本发明涉及基于化学发光技术平台的主要蚊媒病毒和寄生虫甄别检测基因芯片的制备和使用方法。本发明的基因芯片可以用于检测蚊媒传播的病毒12种、寄生虫7种。包含检测蚊媒病毒的14条特异性引物和13条特异性寡核苷酸探针；检测蚊媒寄生虫的6条特异性引物和8条特异性寡核苷酸探针。病毒和寄生虫探针分别分布在载体上。本发明包括了基因芯片的制备方法：1.引物探针设计合成；2.芯片的制备。本发明还包括了基因芯片的使用方法：1.蚊媒病毒RNA和寄生虫质粒的提取；2.多重RT-PCR/PCR扩增；3.芯片杂交；4.杂交后清洗；5.标记；6.芯片扫描；7.数据分析。本发明具有快速、高通量、高灵敏度、高特异性的特点。

主权项

一种主要蚊媒病毒和寄生虫甄别检测基因芯片，本发明的基因芯片可以用于检测蚊媒传播的病毒12种(登革热病毒1‑4、日本脑炎病毒、黄热病病毒、圣路易士脑炎病毒、西尼罗河病毒、东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔贡亚热病毒)、寄生虫7种(间日疟原虫、三日疟原虫、恶性疟原虫、卵形疟原虫、班氏丝虫、马来丝虫、帝汶丝虫)。其特征是包含检测蚊媒病毒的14条特异性引物和13条特异性寡核苷酸探针；检测蚊媒寄生虫的6条特异性引物和8条特异性寡核苷酸探针；1条质控探针和载体。蚊媒病毒探针和寄生虫探针分别分布在载体上。对蚊媒病毒检测的特异性寡核苷酸探针序列对蚊媒寄生虫检测的特异性寡核苷酸探针序列质控探针编号名称序列(5’‑3’)长度22Control‑1TTTTTTTTTTTTTTTTTTTT20蚊媒病毒靶基因特异引物蚊媒寄生虫靶基因特异引物编号引物序列(5’‑3’)长度引物方向37MAL‑F1GGGAGTGAAGACGATCAGATACC23正向引物38MAL‑R1CCGTGTTGAGTCAAATTAAGCC22反向引物39BM/WBFAGCGTGATGGCATCAAAGTAG21正向引物40WBRAGGTTATACCAAGCAAACAAAAA23反向引物41MGB‑HhaI‑ForGCAATATACGACCAGCAC18正向引物42MGB‑HhaI‑RevACATTAGACAAGGAAATTGGTT22反向引物