[发明专利]EHNV抗血清的制备方法及应用

摘要

本发明涉及水生动物疾病防治领域，具体而言，涉及EHNV抗血清的制备方法及其应用。该EHNV抗血清的制备方法，其包括高纯度抗原的制备、纯化以及免疫并获得EHNV抗血清等步骤。本发明提供的该EHNV抗血清的制备方法，其实现了EHNV抗血清的制备，在该方法中，采用了低速长时离心方法，获得了高浓度EHNV(纯化后病毒)，将其作为抗原，对实验动物进行免疫操作，为制备特异性强和效价高的抗血清奠定了基础；解决了我国EHNV检测技术中免疫学诊断试剂高度依赖进口、检测成本高等问题，进而有利于EHNV免疫学诊断方法的推广使用。

主权项

一种EHNV抗血清的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：在新培养敏感细胞中加入EHNV病毒液，吸附预定时间后再加入M199培养基进行培养，得到病变细胞液；将所述病变细胞液于10000×g‑14000×g离心25‑35min，得到第一上清液和第一沉淀；将所述第一沉淀用部分所述第一上清液重悬，然后利用液氮和35‑37℃水浴反复冻融3‑4次，再进行超声波粉碎3‑4次后，于6000×g‑7000×g离心10‑20min，得到第二上清液；将所述第一上清液和所述第二上清液合并后于8000×g‑12000×g离心7‑9h，得到第二沉淀；将所述第二沉淀用Tris‑HCl重悬，得到重悬病毒液；利用蔗糖密度梯度离心法将所述重悬病毒液进行纯化，得到纯化后病毒；以所述纯化后病毒作为抗原，免疫实验动物3‑4次后采血，获得血样，将所述血样于35‑37℃温箱放置1‑2h后，4℃放置半天，待血清析出后于2800‑3200r/min离心8‑12min，得到EHNV抗血清。