[发明专利]一种基于实时荧光定量PCR平台的基因突变分析判定方法

摘要

本发明公开了一种基于实时荧光定量PCR平台的基因突变分析判定方法，利用目的基因的荧光定量PCR扩增结果进行分析判别，所述分析判定方法的步骤如下：第一步、在PCR实验结束以后，将实验结果运行CT值的计算，判断CT值，以确定是否继续分析实验情况；第二步、运行内控，根据内控结果判定DNA样品是否合格；第三步、运行阳性质控品，根据阳性质控品的CT值判定实验体系是否合格；第四步、如果CT值经上述步骤检验分析合格，则运行Tm calling程序，通过熔解曲线分析和CT值分析，判读样本是否存在突变。本发明对于PCR结果判读明确客观，根据扩增数据和熔解曲线完成对样本基因类型的判读，误判率低。

主权项

一种用于非疾病治疗和诊断目的的基于实时荧光定量PCR平台的基因突变分析判定方法，利用目的基因的荧光定量PCR扩增结果进行分析判别，其特征在于，所述分析判定方法的步骤如下：第一步、在PCR实验结束以后，将实验结果运行CT值的计算，判断CT值，以确定是否继续分析实验情况；第二步、运行内控，根据内控结果判定DNA样品是否合格；第三步、运行阳性质控品，根据阳性质控品的CT值判定实验体系是否合格；第四步、如果CT值经上述步骤检验分析合格，则运行Tm calling程序，通过熔解曲线分析和CT值分析，判读样本是否存在突变；所述第一步判断CT值，是指当CT值≥cut‑off值时，表明无模板对照应无特异扩增，或仅引物二聚体导致的荧光信号增强，对试验的影响极微，可以继续分析；其中，cut‑off值是设定的临界值，是45.0；所述第二步根据内控结果判定，是指当CT值<cut‑off值时，可以继续分析，如果CT值≥cut‑off值，则说明样品DNA降解严重，不适合试验需要；所述第三步根据阳性质控品的CT值判定，是指当CT值<cut‑off值，溶解曲线最高峰的Tm值在相应突变的范围内，说明试验体系正常，可以继续分析试验结果；所述第四步具体为：运行Tm calling程序，若样本溶解曲线最高峰的Tm值在相应突变的范围内，并且CT值<cut‑off值，表明扩增区段发生突变；若样本存在以下三种情况之一，则判断为阴性：a，无扩增；b，有扩增，CT值≥cut‑off值；c，有扩增，CT值<cut‑off值，但是运行Tm calling程序，熔解曲线最高峰的Tm值不在相应突变的范围内。