[发明专利]一种文冠果的无性快繁方法

摘要

本发明涉及一种文冠果的无性快繁方法，通过合子胚的诱导接种、体细胞胚的继代与增殖培养、不定芽的继代培养、体细胞胚的萌发培养、不定芽旳生根培养、炼苗共六步骤实现；本发明提供一种文冠果的快速无性繁殖方法，从根本上解决文冠果种源不足的问题，实现快速繁殖，并能保持植株的优良性状，满足文冠果在经济、药用、观赏树种等各方面的应用需求。

主权项

一种文冠果的无性快繁方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)合子胚的诱导接种：将文冠果果实先用洗衣粉水清洗表面，多次喷洗和擦拭，用灭菌解剖刀将其切开，取出种子放在无菌培养皿内(垫有无菌滤纸)；用灭菌镊子和解剖刀去除种皮，取出其中的合子胚，切成0.3cm³小块，接种到含有不同植物生长调节剂6‑BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L的MS培养基中，暗培养；(2)体细胞胚的继代与增殖培养：将上述诱导的体细胞胚按照体细胞胚的发育情况，分别进行继代培养：体细胞胚发育良好的，切离外植体，继代在不含任何生长调节剂的MS培养基中；体细胞胚不易剥离的，连同外植体一起继代在其诱导率较高的新鲜培养中；暗培养28d，观察统计体细胞胚的继代生长情况；(3)不定芽的继代培养：将诱导培养获得的不定芽按照发育生长情况，分别进行继代培养：不定芽长势较好的连同外植体切成5cm³块小，转移到6‑BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L的新鲜培养基中；不定芽长势较弱的连同外植体切成5cm³小块，转移到6‑BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L培养基中；仅有芽点状突起的外植体，直接转入6‑BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L的新鲜培养基中，继续进行诱导；(4)体细胞胚的萌发培养：将外观形态发育成熟的了叶胚，转入不加任何植物生长调节剂的1/2MS和MS培养基中进行萌发；(5)不定芽旳生根培养：选取生长较整齐一致的不定芽，切取2.5cm，接种在含6‑BA(0.4‑1.0mg/L)、NAA(0.2‑0.4mg/L)和2％蔗糖的1/2MS培养基中诱导生根；(6)炼苗：选取生根的不定芽，在MS+6‑BA0.2mg/L+NAA0.2mg/L的条件下，暗培养。