[发明专利]一种制备利那洛肽的方法

摘要

本发明涉及一种制备利那洛肽的方法。本发明的具体步骤为：A）结合固液相方法合成五肽片段Ⅰ：Fmoc‑CysCysGluTyrCys‑SBzl；B）通过固相方法合成九肽片段树脂Ⅱ：H‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；C）将五肽片段Ⅰ加入九肽片段树脂Ⅱ中，通过硫酯交换和S→N 酰基转移得到新的14肽片段树脂，脱Fmoc保护基，裂解后得到纯度相对较高的利那洛肽线性肽；D）最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。本发明通过硫酯交换和S→N 酰基转移提供了一种合成条件温和，纯度、收率较高，适合规模化生产的利那洛肽的制备工艺。

主权项

一种制备利那洛肽的方法，所述方法步骤如下：步骤1，结合固液相方法合成五肽片段Ⅰ：Fmoc‑CysCysGluTyrCys‑SBzl；五肽片段I的合成方法包括如下步骤：1)采用2‑CTC树脂为起始树脂，在活化剂系统的存在下，Fmoc‑Cys(Trt)‑OH和2‑CTC树脂偶联得到取代度为0.10‑0.90mmol/g的Fmoc‑Cys(Trt)‑CTC树脂；2)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除上Fmoc‑Cys(Trt)‑CTC树脂的Fmoc保护基，得到H‑Cys(Trt)‑CTC树脂；3)在偶联剂系统的存在下，H‑Cys(Trt)‑CTC树脂和Fmoc保护且侧链保护的酪氨酸偶联得到Fmoc‑Tyr(tBu)‑Cys(Trt)‑CTC树脂；4)重复步骤2)、3)，依次进行Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH的偶联得到Fmoc‑Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)‑CTC树脂；5)采用由体积比为1:4的TFE和DCM组成的裂解液裂解树脂后得到Fmoc‑Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)‑OH；6)采用液相方法，Fmoc‑Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)‑OH、HSBzl和DIC偶联得到合成Fmoc‑Cys(Trt)Cys(Trt)Glu(OtBu)Tyr(tBu)Cys(Trt)‑SBzl；7)采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去五肽侧链保护基得到五肽片段Ⅰ：Fmoc‑CysCysGluTyrCys‑SBzl；步骤2，通过固相方法合成九肽片段树脂Ⅱ：H‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；九肽树脂的合成方法包括如下步骤：1)采用王树脂为起始树脂，在活化剂系统的存在下，Fmoc‑Tyr(tBu)‑OH和王树脂偶联得到取代度为0.10‑0.90mmol/g取代度的Fmoc‑Tyr(tBu)‑王树脂；2)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除上Fmoc‑Tyr(tBu)‑王树脂的Fmoc保护基，得到H‑Tyr(tBu)‑王树脂；3)在偶联剂系统的存在下，H‑Tyr(tBu)‑王树脂和Fmoc保护且侧链保护的半胱氨酸偶联得到Fmoc‑Cys(Trt)‑Tyr(tBu)‑王树脂；4)重复步骤2)、3)，依次进行Fmoc‑Gly‑OH、Fmoc‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Cys(Trt)‑OH、Fmoc‑Ala‑OH、Fmoc‑Pro‑OH、Fmoc‑Asn(Trt)‑OH、Fmoc‑Cys(Mmt)‑OH的偶联得到Fmoc‑Cys(Mmt)Asn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；5)采用由体积比为1:2:7的TFE、AcOH和DCM的裂解液去Mmt保护基得到Fmoc‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；6)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到九肽片段树脂Ⅱ：H‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；步骤3，将Fmoc‑CysCysGluTyrCys‑SBzl溶解DMF中加入H‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂，在25℃下反应4小时，得到Fmoc‑CysCysGluTyrCys‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；2)采用由体积比为1:4的哌啶和DMF组成的去保护液脱除Fmoc保护基得到H‑CysCysGluTyrCys‑CysAsn(Trt)ProAlaCys(Trt)Thr(tBu)GlyCys(Trt)Tyr(tBu)‑王树脂；3)采用由体积比为2.5∶5∶5∶87.5的EDT、PhSMe、H2O和TFA的裂解液去侧链保护基同时将多肽从树脂上裂解下来得到利那洛肽线性肽粗肽；步骤4，最后采用GSH/GSSH氧化体系氧化得到利那洛肽。