[发明专利]一种补体介导的血清抗体依赖性杀菌活性的检测方法

摘要

本发明公开一种补体介导的血清抗体依赖性杀菌活性的检测方法，包括菌悬液的制备及样品处理、杀菌检测和显色判定，当阳性血清对照组为阳性结果，阴性血清对照组、补体空白对照组和细菌活性对照组均为阴性结果时，待检血清显色或出现针尖状沉淀为阴性结果，即不具有杀菌活性；待检血清不显色或出现片状沉淀为阳性结果，即具有杀菌活性。本发明方法无需采用肉眼逐一进行活菌计数，仅通过显色或不显色就可直观、快速地判定待检血清是否具有杀菌活性，每块微孔板同时设立各照为检测结果成立的条件，其检测步骤简便、快速、可靠准确。

主权项

一种补体介导的血清抗体依赖性杀菌活性的检测方法，包括以下步骤：(1)菌悬液的制备及样品处理①菌悬液制备在琼脂固体培养基斜面上复苏菌种，接种至液体培养基中扩增培养得到菌液，按照比浊法确定菌液的工作浓度，用生理盐水将菌液稀释成工作浓度即得菌悬液；②试剂准备显色剂配制成质量体积分数为0.1％～3％的显色剂溶液，将显色剂溶液过滤除菌，于2～8℃避光保存；③样品处理补体为与免疫动物非同源的动物血清、阴性血清为免疫动物注射生理盐水的血清，阳性血清为市售的目标菌的诊断血清，补体稀释至5～10倍，阳性血清和阴性血清分别稀释至原倍～10倍，将稀释5～10倍的补体与菌悬液按体积比为1:1～1:2的比例混合后冰浴静置2～30分钟得到活化菌悬液；(2)杀菌检测①加样稀释取待检血清加至无菌微孔板的样品孔中，用生理盐水进行倍倍稀释；阳性对照样品孔、阴性对照样品孔中分别加入稀释至原倍～10倍的阳性血清和稀释至原倍～10倍的阴性血清；补体空白对照孔和细菌活性对照孔分别加入液体培养基，每个对照重复三孔；②杀菌反应除细菌活性对照孔外，微孔板中的其余各孔均加入步骤(1)③所述的活化菌悬液，细菌活性对照孔中加入步骤(1)①所述的菌悬液，然后将微孔板于37℃条件孵育1～8小时，再在微孔板的每个孔中加入37℃预热的培养基，再孵育1～12小时；(3)显色判定①显色，在微孔板的每个孔中均加入步骤(1)②所配制的显色剂溶液后，于37℃孵育0.5～6小时显色；或将微孔板于2～8℃静置过夜，在微孔板的每个孔中均加入步骤(1)②所配制的显色剂溶液，于37℃孵育0.5～6小时显色；②判定显色或出现针尖状沉淀为阴性结果，即不具有杀菌活性，不显色或出现片状沉淀的为阳性结果，即具有杀菌活性；当阳性血清对照组为阳性结果，阴性血清对照组、补体空白对照组和细菌活性对照组均为阴性结果时，待检血清显色或出现针尖状沉淀为阴性结果，即不具有杀菌活性；待检血清不显色或出现片状沉淀为阳性结果，即具有杀菌活性。