[发明专利]一种获得红掌单倍体植株的方法

摘要

本发明公开了一种获得红掌单倍体植株的方法，属于花卉苗木的遗传育种技术领域。方法包括：（1）培养基的配制；（2）花序的选择、低温预处理与消毒；（3）诱导愈伤组织；（4）增殖培养；（5）分化培养；（6）生根培养；（7）移栽炼苗；（8）染色体鉴定；（9）单倍体扩繁等步骤。本发明红掌花序经5-8℃低温预处理24-72h后，能显著提高其无菌花药的获得率和有效愈伤组织的诱导率，从而能有效获得红掌单倍体植株，且操作方法简便、可以作为育种材料进一步从中选育出红掌新品种，缩短育种年限。

主权项

一种获得红掌单倍体植株的方法，其特征在于按以下步骤进行：（1）培养基的配制：包括花药培养各阶段的培养基，其中，1）诱导培养基：1/2MS基本培养基添加0.5‑3mg/L 2,4‑D、0.5‑2mg/L 6‑BA、30‑70g/L蔗糖、20g/L葡萄糖、6g/L琼脂粉，pH灭菌前5.8；2）增殖培养基：MS基本培养基添加1.0mg/L 6‑BA、30g/L蔗糖，pH灭菌前5.8；3）分化培养基:MS基本培养基添加1.0mg/L 6‑BA、30g/L蔗糖，pH灭菌前5.8； 4）生根培养基:1/2MS基本培养基添加1g/L活性炭、20g/L蔗糖，pH灭菌前5.8；（2）花序的选择、低温预处理与消毒：待红掌佛焰苞花序抽出后，从中选择苞片即将开展的花序，剪下并除去其苞片，用酒精棉擦洗花序表面后放入培养瓶中，于5‑8℃低温条件下处理24‑72h；再将该花序用自来水冲洗3‑5min，加少量洗洁精，轻轻搓洗片刻后，用自来水冲洗掉洗洁精和表面污染物，再在超净工作台上用75%酒精浸泡30s后，用0.1%升汞溶液摇晃消毒10‑15min，倒掉升汞溶液，用无菌水冲洗5次后，备用；（3）诱导愈伤组织：将低温预处理、消毒的花序用刀片横切，用解剖针剥出花药后，接种到诱导培养基中诱导培养4个月，其中的无菌花药将诱导产生愈伤组织，且对污染花药要及时剔除；（4）增殖培养：将诱导产生的愈伤组织转接到增殖培养基中，经继代培养至愈伤组织进入增殖期；（5）分化培养：将快速增殖期的愈伤组织转接种到分化培养基上，诱导分化成芽；（6）生根培养：当芽长至2cm时，从愈伤组织上切下并转接到生根培养基上诱导生根，长成幼苗；（7）移栽炼苗：当幼苗长至4‑5cm时，将该幼苗从培养瓶移栽到大棚穴盘中炼苗；（8）染色体鉴定：当移栽苗新根长出后，取其白色幼嫩根尖0.3‑0.5 cm，于室温黑暗条件下，用0.002 mol/L 8‑羟基喹啉浸渍处理2‑3 h；清水洗净后于4℃条件下用95%乙醇∶冰醋酸= 3 ∶1新鲜配制的卡诺固定液固定18‑24 h；弃去固定液后将根尖置于37℃水浴中，用0.2mol/L HCl酸解15‑20 min后，用蒸馏水冲洗3次；切取该根尖的分生组织放在预先滴一滴石炭酸品红染料的载玻片上，用镊子压碎根尖，弃去残渣，盖上盖玻片后，吸干多余的染料，在40×10倍显微镜下拍照、观察、鉴定；（9）单倍体扩繁：将确定为单倍体的植株进行组培扩繁。