[发明专利]基于硝酸盐还原酶的工程菌及其实现方法在审
| 申请号： | 201410373906.8 | 申请日： | 2014-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN104140944A | 公开（公告）日： | 2014-11-12 |
| 发明（设计）人： | 周培;冯海玮;孙玉静;支月娥;唐冬;卫星;罗艳青;毛亮 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12N9/06;C12R1/19;C12R1/465 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人： | 王毓理;王锡麟 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程技术领域的硝酸盐还原酶的工程菌及其实现方法，以灰略红链霉菌基因组DNA为模板，与含有酶切位点的引物进行PCR扩增依次得到编码硝酸盐还原酶催化亚基及电子转移亚基的核苷酸序列；然后将扩增得到的基因序列依次连接到共表达载体pETDuet‐1，最终获得重组共表达载体pETDuet‐NB‐NA；之后将该硝酸盐还原酶表达载体转化到大肠杆菌表达菌株。本发明针对现有技术存在的由于硝酸盐还原酶在生物体内多为胞内酶且表达量较低导致的应用范围和效果严重受限等不足，应用基因工程手段实现硝酸盐还原酶体外的大量表达合成，对于次生盐渍化土壤的快速修复乃至实现精准农业具有重大意义。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 硝酸盐 还原酶 工程 及其 实现 方法 | ||
【主权项】：
一种硝酸盐还原酶的工程菌，其特征在于，该工程菌为外源表达硝酸盐还原酶的大肠杆菌；所述的胞内硝酸盐还原酶具体为灰略红链霉菌(Streptomyces griseorubens)JSD‐1硝酸盐还原酶编码基因，由硝酸盐还原酶催化亚基SG‐NA和电子转移亚基SG‐NB构成，其核苷酸序列分别为2394bp和2127bp，分别编码797和708个氨基酸，其中：硝酸盐还原酶催化亚基SG‐NA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，氨基酸序列如SEQ ID No.3所示；硝酸盐还原酶电子转移亚基SG‐NB的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，氨基酸序列如SEQ ID No.4所示。
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