[发明专利]一种两阶段补料策略促进枯草芽孢杆菌持续表达伊枯草菌素的方法在审
| 申请号： | 201410378285.2 | 申请日： | 2014-07-31 |
| 公开（公告）号： | CN104140991A | 公开（公告）日： | 2014-11-12 |
| 发明（设计）人： | 黄凤洪;金虎;钮琰星;李坤朋;张欣然;郭勉;万楚筠;李文林;胡传炯 | 申请（专利权）人： | 中国农业科学院油料作物研究所 |
| 主分类号： | C12P21/04 | 分类号： | C12P21/04;C12R1/125 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 430062 湖*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明属于提高伊枯草菌素产量技术领域。一种两阶段补料策略促进枯草芽孢杆菌持续表达伊枯草菌素的方法，其特征在于包括如下步骤：1)菌株活化：先将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis3-10)转斜面在28℃培养箱中培养24小时，培养基为LB琼脂培养基，得到活化的枯草芽孢杆菌；2)摇瓶培养；3)发酵罐培养；4)当发酵过程中还原糖浓度降至3～4g/L时开始进行流加培养，流加培养基为：葡萄糖500g，水1L；流加培养过程采用两阶段控制策略，前期葡萄糖的流加速率控制在0.56g/L/h，80h后将流加速度降至0.28g/L/h，直至发酵120h结束，取上清液。利用本发明能实现伊枯草菌素的产量持续高效表达，整个发酵过程中无葡萄糖积累。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 阶段 策略 促进 枯草 芽孢 杆菌 持续 表达 菌素 方法 | ||
【主权项】：
一种两阶段补料策略促进枯草芽孢杆菌持续表达伊枯草菌素的方法，其特征在于包括如下步骤：1)菌株活化：先将枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis3‑10)转斜面在28℃培养箱中培养24小时，培养基为LB琼脂培养基，得到活化的枯草芽孢杆菌；2)摇瓶培养：挑取活化的枯草芽孢杆菌单菌落于LB液体培养基中进行摇瓶培养14小时，温度为28℃，转速为220rpm；3)发酵罐培养：将摇瓶培养的枯草芽孢杆菌在发酵培养基中进行发酵120小时，发酵条件为：接种量2％(v/v)，pH7.0，发酵通风比为2：1(vvm)，搅拌转速600rpm；所述发酵培养基组成：菜粕90g/L，葡萄糖20g/L，K2HPO4·3H2O1g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，MnSO4·H2O0.005g/L，水1L；4)当发酵过程中还原糖浓度降至3～4g/L时开始进行流加培养，流加培养基为：葡萄糖500g，水1L；流加培养过程采用两阶段控制策略，前期葡萄糖的流加速率控制在0.56g/L/h，80h后将流加速度降至0.28g/L/h，直至发酵120h结束，取上清液。
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