[发明专利]一种谷胱甘肽的抗干扰检测方法

摘要

一种谷胱甘肽的抗干扰检测方法，目前，谷胱甘肽主要由生物法合成，因此产物中往往残留半胱氨酸，其中巯基性质接近导致对谷胱甘肽的检测有干扰，亟需发明一种抗干扰检测技术。本发明通过引进干扰系数和补偿系数来定量和补偿干扰对谷胱甘肽检测结果的影响，修正检测偏差，在不分离半胱氨酸的条件下，仍能排除半胱氨酸的干扰，检测谷胱甘肽同时定量半胱氨酸。本发明填补了分光光度法检测含干扰样品中谷胱甘肽的技术空白，实现一种新的分光光度法的抗干扰检测，有效简化谷胱甘肽检测方法，是一种有应用价值的抗干扰检测方法。

主权项

一种谷胱甘肽的抗干扰检测方法，其特征是：A、制作标准曲线:配制标准样浓度为0.05，0.10，0.15，0.20，0.25mmol/L的GSH，各取1mL，分别加入1mL 0.05～0.50mol/L四氧嘧啶水溶液，2mL 0.20～0.50mol/L pH为10.0～10.8的NaOH‑Na₂HPO₄缓冲液，于超级恒温槽中30～60℃水浴10～20min，水浴完成后降至室温检测；以水代替GSH添加四氧嘧啶、缓冲液后作空白样，检测标准样在320nm处吸光度Abs320，制作GSH浓度‑吸光度的标准曲线；B、干扰补偿设计：(1)干扰试验：配制不同浓度比例干扰的混合样即GSH浓度0.05，0.10，0.15，0.20，0.25mmol/L，Cys浓度分别为GSH浓度的0‑8倍，即干扰比例在1:0‑1:8之间；在步骤A的条件下混合样代替标准样分别检测其320nm处吸光度Abs320和导数K320；(2)引进系数：干扰的影响表现为吸光度与导数的变化，因此定义“干扰系数”α＝K320/Abs320，表示对检测结果的干扰水平大小，制作干扰系数表；并用吸光度与标准曲线方程计算出干扰试验各个混合样的回收率，表示干扰影响GSH检测的结果，定义该值为“补偿系数”β，制作补偿系数表，将接步骤C计算得到的GSH中间浓度C₁除以β得到修正后的检测结果；C、样品检测流程如下(1)未知样品按步骤A检测，可得两个数值，即吸光度Abs320和导数K320；(2)计算干扰系数α＝K320/Abs320，由Abs320与标准曲线方程计算得GSH中间浓度C₁；(3)α与C₁代入干扰系数表，以数值接近为原则，确定干扰比例β；β与C₁代入补偿系数表，确定补偿系数γ；(4)计算GSH浓度C_GSH＝C₁/γ，Cys浓度C_Cys＝C_GSH/β，至此流程结束。