[发明专利]醛酮还原酶的重组菌粗酶体系催化合成(S)-N,N-二甲基-3-羟基-3-(2-噻吩)-1-丙胺的方法

摘要

醛酮还原酶的重组菌粗酶体系催化合成(S)‑N,N‑二甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩)‑1‑丙胺（(S)‑DHTP）的方法，属于生物催化不对称转化技术领域。本发明是在重组菌粗酶体系中添加辅助底物和初始量辅酶NADP⁺促进体系中的辅酶NADPH的再生循环，反应底物为N,N‑二甲基‑3‑酮‑3‑(2‑噻吩)‑1‑丙胺（DTKP），重组菌为表达醛酮还原酶基因的E. coli BL21(DE3)(pETCPAR4)，醛酮还原酶基因cpar4来自于近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis）CCTCC NO：M 203011，该基因编码醛酮还原酶CPAR4，催化不对称还原DKTP为(S)‑DHTP。本发明利用该无细胞系统催化反应，无需在反应体系中额外添加辅酶再生所需的耦联酶，提高了酶与底物直接作用的效率，缩短反应时间，获得较好的转化效果。

主权项

一种通过醛酮还原酶的重组菌粗酶体系催化合成(S)‑N,N‑二甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩)‑1‑丙胺的方法，其特征在于：以醛酮还原酶的重组菌粗酶体系为催化剂，并在该体系中添加辅助底物和初始辅酶NADP⁺实现辅酶NADPH的再生循环，同时催化（N,N‑二甲基‑3‑酮‑3‑(2‑噻吩)‑1‑丙胺DKTP不对称转化反应制备光学纯(S)‑N,N‑二甲基‑3‑羟基‑3‑(2‑噻吩)‑1‑丙胺，即(S)‑DHTP；所用的辅助底物为葡萄糖、海藻糖、麦芽糖、乳糖、乙醇、或果糖，浓度为10 g/L；辅酶NADPH初始添加量为0.005~0.2 mM；反应的底物为N,N‑二甲基‑3‑酮‑3‑(2‑噻吩)‑1‑丙胺，重组菌为表达醛酮还原酶基因的重组大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)(pETCPAR4)，醛酮还原酶基因cpar4来自于近平滑假丝酵母（Candida parapsilosis）CCTCC NO：M 203011，其基因的核苷酸序列为：SEQ ID NO：1，该基因编码醛酮还原酶，催化不对称还原DKTP为(S)‑DHTP的反应。