[发明专利]一种RGD标记的荧光金纳米簇的制备方法

摘要

本发明公开了一种RGD标记的荧光金纳米簇的制备方法，所述的方法为：用BSA法制备粒径小于2nm的金纳米粒子；将制备好的金纳米簇与带有氨基的RGD进行酰胺化反应，得到RGD标记的荧光金纳米簇。本发明得到的金纳米团簇(Au Nanoclusters,AuNCs)是一种新型贵金属荧光纳米材料，具有以下特性：制备条件、步骤简单，在可见光源下呈近红外光发射，粒径小，单分散性和稳定性好，毒副作用小，安全性高，荧光性能稳定，CT成像造影分辨率高。α_vβ₃整合素在大多数正常组织和成熟血管内皮细胞中仅有少量的表达，但是在多种癌细胞和新生血管内皮细胞中过度表达，其配体称为RGD多肽序列。本发明选用RGD作为靶向分子，将AuNCs与RGD多肽序列偶联，制备了一种RGD标记的荧光金纳米簇RGD-AuNCs@BSA。

主权项

一种RGD标记的荧光金纳米簇的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤1,金纳米簇(AuNCs@BSA)的制备方法：步骤1.1，量取质量分数为1％的氯金酸溶液1.7mL，加入3.3mL去离子水，得到5mL，10mM氯金酸溶液，剧烈搅拌；步骤1.2，称取250mg BSA，溶解在5mL去离子水中，得到5mL，50mg mL^‑1 BSA溶液；步骤1.3，称取20mg NaOH，溶解在0.5mL去离子水中，得到1M NaOH水溶液；步骤1.4，将BSA溶液加入剧烈搅拌的氯金酸溶液，控温37℃，持续搅拌30分钟；步骤1.5，将NaOH水溶液(1M，0.5‑5mL)加入上述混合液中；步骤1.6，持续剧烈搅拌上述反应物，控温37℃，持续时间12‑24h；步骤1.7，将得到的产物冷却至室温，装进再生纤维透析袋中，透析外液用水，放置在4℃冰箱中透析12‑48h；步骤1.8，透析后的溶液用10kDa的超滤管离心(3000×g,20min)，得到4mL荧光金纳米簇；步骤2，RGD‑AuNCs@BSA的制备方法：步骤2.1，取2mL超滤离心后的金纳米簇加到8mL PBS缓冲液(PH＝7.4，20mM)中，加入40‑60mg EDC，避光条件室温下反应20min；步骤2.2，加入30‑50mg的NHS，在黑暗中剧烈搅拌1h；步骤2.3，向混合液中倒入c(RGDfk)溶液(1‑10mL，4mg·mL^‑1)，室温下搅拌反应12‑24h；步骤2.4，反应后产物用截留量为10kDa的超滤管离心(3000×g,20min)，去除过量反应物，得到的产物溶于2mL PBS缓冲液(PH7.4，10mM)中。