[发明专利]牡丹花粉蛋白多肽，及制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种以牡丹花粉为原料制备牡丹花粉蛋白多肽的方法，以及该方法制备出的牡丹花粉蛋白多肽，和该蛋白多肽的应用。本发明的牡丹花粉蛋白多肽是牡丹花粉蛋白，或者牡丹花粉多肽。以干燥的牡丹花粉为原料，经过花粉破壁、粗蛋白提取、真空干燥，得到牡丹花粉蛋白；将牡丹花粉蛋白经过蛋白酶解、脱苦脱色、离心或过滤，得到牡丹花粉多肽。该制品可以是粉剂、颗粒、片剂、胶囊、口服液等形式。牡丹蛋白多肽具有降低胆固醇、降血压和促进脂肪代谢、抗疲劳、增强人体免疫力、调节人体生理机能等功效优势，在食品工业、保健和医药等领域具有广阔的开发应用前景。

主权项

1.一种牡丹花粉蛋白多肽的制备方法，其特征在于，以干燥的牡丹花粉为原料制备而成，所述方法包括将牡丹花粉经过花粉破壁、粗蛋白提取、真空干燥，得到牡丹花粉蛋白，并进一步将牡丹花粉蛋白经过蛋白酶解、脱苦脱色、离心或过滤，得到牡丹花粉多肽，其中，所述的花粉破壁为超微化破壁、或旋风粉碎法破壁，所述超微化破壁，在于将牡丹花粉用行星球磨机超微化破壁，转速 400‑600r/min，粉碎时间为0.5‑1.5h，球料比为6.8‑7；所述旋风粉碎法破壁，在于采用旋风粉碎法，将牡丹花粉放入旋风式高速样品粉碎机中粉碎1‑5min，其中，所述粗蛋白提取包括（1）水溶蛋白提取步骤，所述水溶蛋白提取步骤，在于将破壁后的花粉，按料水比1：10‑20加入蒸馏水，4‑60℃搅拌提取1‑8h，并经4000‑8000r/min离心10‑20min后收集上清液，残留物备用，在上清液中逐级加入一定量固体硫酸铵，使硫酸铵饱和度依次达到40%、60%、80%，每次充分搅拌1h，4000‑8000r/min离心10‑20min后，收集各级沉淀，用pH5.0‑7.0的磷酸盐缓冲液溶解，然后用截留分子质量为100KDa的超滤膜进行超滤，得到水溶粗蛋白溶液；（2）盐溶蛋白提取，在于将上述水溶液提取后的残留物，按料液比1：10‑20加入0.15‑0.50mol/L氯化钠溶液，4‑60℃搅拌提取1‑8h，并经4000‑8000r/min离心10‑20min后收集上清液，残留物备用，在上清液中加入一定量固体硫酸铵，使硫酸铵饱和度达到40%，充分搅拌1h，4000‑8000r/min离心10‑20min后，收集沉淀，用上述同等浓度的氯化钠溶液溶解，然后用截留分子质量为100KDa的超滤膜进行超滤，得到盐溶粗蛋白溶液；（3）醇溶蛋白提取，在于将上述氯化钠溶液提取后的残留物，按料液比1：10‑20加入75%乙醇溶液，4‑60℃搅拌提取1‑8h，并经4000‑8000r/min离心10‑20min后收集上清液，残留物备用，在上清液中按料水比1：20‑30加入蒸馏水，充分搅拌1h，4000‑8000r/min离心10‑20min后，收集沉淀，用75%乙醇溶解，4℃下用蒸馏水透析24h后，得到醇溶粗蛋白沉淀；（4）碱溶蛋白提取，在于将上述乙醇溶液提取后的残留物，按料液比1：10‑20加入0.10‑0.75mol/L NaOH溶液，4‑60℃搅拌提取1‑8h，并经4000‑8000r/min离心10‑20min后收集上清液，在上清液中加入一定量固体硫酸铵，使硫酸铵饱和度达到40%，充分搅拌1h，4000‑8000r/min离心10‑20min后，收集沉淀，用上述同等浓度的NaOH溶解，然后用截留分子质量为100KDa的超滤膜进行超滤，得到碱溶粗蛋白溶液；其中真空干燥，在于将上述水溶粗蛋白溶液、盐溶粗蛋白溶液、醇溶粗蛋白沉淀、碱溶粗蛋白溶液，分别真空冷冻干燥，在‑55℃~‑40℃温度下，得到牡丹花粉水溶蛋白、盐溶蛋白、醇溶蛋白、碱溶蛋白；所述牡丹花粉蛋白，是牡丹花粉水溶蛋白、牡丹花粉盐溶蛋白、牡丹花粉醇溶蛋白、牡丹花粉碱溶蛋白四种蛋白混合。