[发明专利]一种改进的测定氨基酸含量的方法

摘要

本发明提出了一种改进的测定氨基酸含量的方法，首先对试样进行处理，试样与盐酸在安瓿瓶中混合后消化，消化冷却后加入乙醇消泡，加水稀释后过滤待用；用柠檬树钠将标样稀释25倍后待用，配置流动相A、流动相B和流动相C，然后配置反应液A和反应液B，再在高效液相色谱仪上对试样和标样分别测试分析，根据出峰时间可以鉴定样品中氨基酸的种类，将样品峰面积与标样对比，计算样品中各种氨基酸含量。本发明方法加入乙醇既可消泡，因此不会影响定容刻度的判断，又不会结果对结果产生影响，本发明方法步骤简单，易于操作。

主权项

一种改进的测定氨基酸含量的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）准确称取试样0.1000g于10ml安瓿瓶中,然后向瓿瓶中准确加1+1的盐酸5ml,将安瓿瓶封口,冷却后,用胶布包好安瓿瓶，防止在恒温消化时安瓿瓶破裂，置于恒温干燥箱中消化；（2）消化完成后取出安瓿瓶冷却至室温,切开安瓿瓶,过滤消化液,立即准确移取1mL滤液于50mL容量瓶中，此时容量瓶内很多泡沫，加2‑3滴乙醇消泡，然后加水稀释至刻度；（3）稀释液通过0.45μm孔径的滤膜过滤，得到的滤液待用；滤液可在4℃条件下存放4小时；（4）标样的稀释处理用pH2.20的0.07mol/L柠檬酸钠稀释2.5μmol/mL的标样25倍,得浓度为0.1μmol/mL的标样待用,所述稀释标样可在4℃条件下保存1个月；（5）配制流动相流动相A液：称取58.8g柠檬酸钠，溶解于2.5L水中，加乙醇210mL，加高氯酸50mL，加水稀释至3L，将该稀释液用60%高氯酸或4mol/L氢氧化钠，准确调节pH值至3.20，并通过0.45mm孔径的滤膜过滤；流动相B液:称取柠檬酸钠58.8g和硼酸12.4g溶解于800mL水中,加4mol/L氢氧化钠溶液30mL，加水稀释至1L，将该稀释液用60%高氯酸或4mol/L氢氧化钠溶液调节其pH值为10.00并通过0.45μm孔径的滤膜过滤；流动相C液:称取氢氧化钠4g，加水稀释至500mL，并通过0.45μm孔径的滤膜过滤；以上三种流动相不用时均应在4℃环境中存放；（6）反应液的配制硼酸‑碳酸钠缓冲溶液：称取122.1g无水碳酸钠、56.4g硫酸钾和40.7g硼酸加水至3L；A反应液：用量筒量取500mL硼酸‑碳酸钠缓冲溶液倒入试剂瓶中，加0.2mL氯酸钠溶液,混合均匀；B反应液：称取邻苯二甲醛400mg,加乙醇7mL、2‑巯基乙醇1mL、10%的十二烷基聚乙二醇醚2mL，用硼酸‑碳酸钠缓冲溶液定容至500ml；以上A、B反应液可在4℃条件下保存7天；（7）上机分析用微量注射器注入10μL试样及标样于高效液相色谱仪上进入分析,得色谱图；根据出峰时间鉴定样品中氨基酸的种类,将样品峰面积与标样对比,计算样品中各种氨基酸含量。