[发明专利]一种快速测定葡萄糖氧化酶活力的方法

摘要

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种快速测定葡萄糖氧化酶活力的方法。所述方法包括以下步骤：(1)绘制过氧化氢浓度‑邻联茴香胺显色剂吸光值标准曲线；(2)对待测葡萄糖氧化酶样品进行预处理；(3)利用过氧化氢浓度‑吸光值标准曲线计算试验样品中葡萄糖氧化酶活力。该方法快速可靠，操作简单，灵敏准确。该检测方法原理是在葡萄糖氧化酶的作用下，葡萄糖和氧反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢和无色的还原型邻联茴香胺在过氧化物酶的作用下，生成水和棕色的氧化型邻联茴香胺，棕色的氧化型邻联茴香胺与硫酸溶液反应变为粉红色，可于最大吸收波长540nm处快速比色测定。

主权项

一种快速测定葡萄糖氧化酶活力的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)绘制过氧化氢浓度‑邻联茴香胺显色剂吸光值标准曲线，先分别吸取过氧化氢标准溶液0.25mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL和0.75mL，分别用磷酸盐缓冲液定容至25mL，配成终浓度分别为24μg/mL～72μg/mL的过氧化氢浓度梯度系列，在试管中依次加入2.5mL邻联茴香胺稀释液、0.3mL葡萄糖溶液、0.1mL辣根过氧化物酶溶液，混匀后再分别加入上述不同浓度过氧化氢标准溶液各0.1mL，混匀后加入2mL 2mol/L的硫酸溶液，振荡均匀后在540nm处用1cm杯测定吸光值，以吸光值为横坐标，过氧化氢浓度为纵坐标绘制标准曲线；(2)对待测葡萄糖氧化酶样品进行预处理，以磷酸缓冲液稀释样品，稀释后的样品中葡萄糖氧化酶活力控制在0.8～2.8U/mL之间；(3)反应时，在试管中依次加入2.5mL邻联茴香胺稀释液、0.3mL葡萄糖溶液、0.1mL辣根过氧化物酶溶液，振荡均匀后在规定温度水浴5min后，测定管加入已稀释的酶样品溶液0.1mL，在规定温度反应3min后，加入2mol/L的硫酸溶液2mL终止反应，振荡均匀并冷却至室温后，在540nm处用1cm杯测定吸光值，以热失活的酶液做空白对照，利用过氧化氢浓度‑吸光值标准曲线计算试验样品中葡萄糖氧化酶活力。