[发明专利]一种水痘病毒滴度快速检测方法

摘要

本发明提供了一种水痘病毒滴度快速检测方法，所述检测方法利用水痘病毒感染单层细胞初期，在感染细胞内复制并大量表达与病毒致病性相关的水痘病毒包膜糖蛋白，通过免疫反应的方法，确定感染病灶，在显微镜下观察计数并计算所述水痘病毒滴度。该方法大大缩短了传统滴度测定法，即蚀斑法，的测定时间，是一种快速、灵敏的检测水痘病毒滴度的方法。

主权项

一种水痘病毒滴度快速检测方法，其特征在于，所述检测方法利用水痘病毒感染单层细胞初期，在感染细胞内复制并大量表达与病毒致病性相关的水痘病毒包膜糖蛋白，通过免疫反应的方法，确定感染病灶，在显微镜下观察计数并计算所述水痘病毒滴度；所述检测方法包括以下步骤：1)病毒接种取人正常胚肺成纤维细胞(MRC‑5细胞)，铺满96孔板单层，将待测水痘病毒样品做梯度稀释，取2～4孔为一组，每组加同一浓度所述水痘病毒稀释液25ul，同时做平行孔和阴性对照孔，轻轻摇动平板使所述水痘病毒均匀地分布，25～45℃，吸附30～90分钟，弃去孔内液体，加入甲基纤维素溶液，25～45℃孵育43～47小时；2)滴度测定向经过上述经病毒接种的每孔以及平行孔和阴性对照孔内，加入新配制预冷甲醛丙酮缓冲液，室温放置5～20分钟，弃去孔内液体，在吸水纸上拍干，每孔加入洗液，洗涤1～5次，再加入普通山羊血清封闭，室温放置2～8分钟，弃去液体，轻轻拍干，加入小鼠抗水痘病毒包膜糖蛋白单克隆抗体，25～45℃孵育20～40分钟，弃去孔内液体，在吸水纸纸上轻拍，洗涤1～5次，加入HRP标记的山羊抗小鼠抗体，在25～45℃孵育20～40分钟，弃去孔内液体，在吸水纸纸上轻拍，洗涤1～5次，加入TMB显色底物，并在室温下避光孵育1～4小时；3)滴度计算使用光学显微镜观察，判定经上述处理后每孔的病灶数，接种同一稀释度的孔病灶数取平均值，所述病毒滴度计算公式为：病毒滴度(PFU/ml)＝平均病灶数×稀释倍数×40(1ml÷25ul)。