[发明专利]一种直接对脐血、羊水或外周血进行扩增的方法

摘要

本发明公开了一种直接对脐血、羊水或外周血进行扩增的方法。以脐血样本、羊水样本或外周血样本作为起始材料，不进行DNA提取，加入核酸扩增所需反应体系，直接进行PCR扩增，测定扩增产物；其中所述的反应体系中含有中性盐、Tris溶液、镁离子、扩增引物、dNTP混合物以及扩增用酶。本发明所提供的PCR扩增方法，不经过核酸的分离和提取过程，不经过任何核酸扩增前预处理步骤，直接从脐血、羊水或外周血中高效扩增目的核酸片段或全基因组核酸。本发明在产前基因诊断及染色体病快速诊断中具有很大的应用前景。

主权项

一种直接对脐血、羊水或外周血进行扩增的非诊断目的的方法，其特征在于以脐血、羊水或外周血作为起始材料，不进行浓缩，也不进行DNA提取，加入核酸扩增反应体系的所需物质构成反应体系，直接进行PCR扩增，测定扩增产物；其中最终的反应体系中含有6 mmol/L ~16 mmol/L的硫酸铵、40 ‑90m mol/L 的Tris溶液、1.5‑3.0 mmol/L镁离子、特异性扩增引物、0.1~0.3 mmol/L 的dNTP混合物和Taq DNA聚合酶；反应体系中特异性引物的浓度为0.8‑1.6 pmol/μl，扩增对象为脐血或外周血时，Taq DNA聚合酶的浓度为0.05‑0.15 U/μl；扩增对象为羊水时，Taq DNA聚合酶的浓度为0.15‑0.2 U/μl；扩增对象为脐血或外周血时，控制反应体系的pH为8.5‑10.0；扩增对象为羊水时，控制反应体系的pH为8.0‑10.0。