[发明专利]一种壳聚糖纳米粒子荧光探针的制备方法

摘要

一种壳聚糖纳米粒子荧光探针的制备方法。本发明通过低分子量的壳聚糖(LCS)聚阳离子与三聚磷酸钠(TPP)的静电作用制备纳米级壳聚糖微球,并利用壳聚糖链上丰富的氨基与荧光素异硫氰酸酯(FITC)反应从而制备纳米壳聚糖微球荧光探针(NFCS)。当壳聚糖分子量为60000,LCS与TPP的质量比为6：1时,可得到粒度均一的球形纳米粒子,平均粒径为40±3nm。荧光倒置显微镜观察证实FITC结合到壳聚糖微球上。荧光光谱分析显示NFCS的最大激发波长、最大发射波长与游离态FITC无显著差异。光漂白实验证实NFCS的稳定性比游离态FITC有显著提高。

主权项

一种壳聚糖纳米粒子荧光探针的制备方法，其特征在于包括如下步骤：（1）取5 g壳聚糖溶解在150 mL 3% 的醋酸溶液中, 逐滴加入50 mL 6% H₂O₂ 溶液, 在40摄氏度水浴中降解；每隔数小时, 取50mL溶液, 用10 mol /L的NaOH 溶液沉淀, 用去离子水洗至中性, 真空干燥备用；（2）称取经不同时间降解的壳聚糖, 溶解于1% ( V /V )的醋酸溶液, 壳聚糖浓度为0. 5% ( m /V)；用10 mo l/L NaOH 调pH = 4. 6‑4. 7，取10 mL上述壳聚糖的醋酸溶液, 逐滴加入3 mL 0. 25% (m /V )TPP溶液, 磁力搅拌, 得到经TPP交联的壳聚糖( CS)纳米粒子悬浊液；以12000 r /m in 高速离心CS纳米粒子10m in, 将上层清液倒掉, 冲洗微球, 备用；（3）将离心后的CS纳米粒子分散在1% ( V /V ) 醋酸溶液中, 壳聚糖的浓度为1 g /L; 加入10 g /L 的FITC无水二甲基亚砜( DMSO)溶液, 壳聚糖纳米粒子分散液和FITC 无水二甲基亚砜溶液的体积比为3 mL：0. 3mL；用锡箔包住反应试管, 避光反应3 h, 得到FITC 标记的壳聚糖纳米荧光探针( N ano‑sizedFITC‑labled chitosan part icles, NFCS)；离心, 洗涤, 用紫外分光光度计在480 nm 检测离心上清液, 直至在此波长下无吸收。