[发明专利]一种稳定高效的草莓种质资源离体保存及恢复生长的方法

摘要

本发明属于植物组织快繁和种质资源保护技术领域，公开了一种稳定高效的草莓种质资源离体保存及恢复生长的方法。具体方法包括(1)无菌苗的获得(2)生长培养(3)抑制生长(4)低温保存(5)检查恢复培养(6)生根移栽等步骤。本发明针对草莓种质资源离体保存存在的问题，不添加植物生长抑制剂通过改进了存放条件和保存容器，使继代培养周期达22‑24个月，比已报道保存条件延长4‑20个月，同时有效地提高种质资源保存的安全性。该方法操作简便，重复性强，技术稳定，适合大规模草莓种质资源的保存，便于国内外种质资源的交换，避免资源在运输过程中发生病虫害传播甚至死苗，同时还可解决保存占地面积大、费用高等问题。

主权项

一种稳定高效的草莓种质资源离体保存及恢复生长的方法，其特征在于，具体方法包括(1)无菌苗的获得(2)生长培养(3)抑制生长(4)低温保存(5)检查恢复培养(6)生根移栽，其步骤如下：(1)无菌苗的获得：是从植株上剪取新长出来的匍匐茎茎尖经流水冲洗1.5‑2h，在无菌操净工作台上，先用75％医用酒精消毒30s，然后再用0.1％升汞水消毒8min，最后无菌水冲洗3‑4次后剥去外层苞片，将茎尖接种在培养基①或②上，置于25±2℃、光照强度2400lx、每天光照时间14～16h的培养室中进行初代培养，25天获得无菌苗；(2)生长培养：取上述无菌苗，切取带1至2叶的茎尖接种在装有培养基①或②的组织培养袋中，后将培养袋置于上述相同条件下培养14天，促进茎尖生长；(3)抑制生长：生长培养结束后，置于22℃，光照强度2400lx，缩短光照至8h的培养室中培养10天；(4)低温保存：抑制生长结束后，置于4℃冰箱中弱光保存，光照强度400lx；(5)检查恢复培养：每隔6个月，对保存的材料进行检查，对生长不好的进行恢复培养；(6)生根移栽：将上述保存达22～24个月的材料置于(3)抑制生长条件下培养5天，然后转接③或④上置于(1)生长培养条件下生根培养25天，炼苗移栽；其中，所述的培养基①是指1/2MS+0.5mg/L6‑BA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH＝5.8的培养基，用于野生资源的分化与保存，培养基②是指MS+0.5mg/L6‑BA+0.1mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH＝5.8的培养基，用于栽培资源分化与保存，培养基③是指1/2MS+30g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH＝5.8的培养基，用于野生资源生根，培养基④是指MS+30g/L蔗糖+6.2g/L琼脂，pH＝5.8的培养基，用于栽培资源生根。