[发明专利]可控的基因组修饰疟原虫、重组表达载体及构建方法、应用有效
| 申请号： | 201410429012.6 | 申请日： | 2014-08-27 |
| 公开（公告）号： | CN105368865B | 公开（公告）日： | 2019-04-09 |
| 发明（设计）人： | 苏钟;王琼 | 申请（专利权）人： | 中国科学院广州生物医药与健康研究院 |
| 主分类号： | C12N15/79 | 分类号： | C12N15/79;C12N15/66;C12N1/11;A61K39/015;A61P33/06;C12R1/90 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 郑彤;万志香 |
| 地址： | 510663 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种可控的基因组修饰疟原虫、重组表达载体及构建方法、应用。该重组表达载体包括基因打靶的长、短同源臂以及位于两同源臂之间的四环素阻遏蛋白基因表达框、乙胺嘧啶抗性基因表达框以及目的基因表达框，而目的基因启动子的多个转录起始位点处插入四环素操纵基因序列，从而该重组表达载体可以用于条件性研究疟原虫基因组中某个功能基因的功能。此外，配合基因敲除技术，将疟原虫基因组中与目的基因对应的功能基因表达序列敲除，同时将该重组表达载体转染进基因敲除的疟原虫内，可以获得可控的基因组修饰疟原虫，并为进一步研究疟原虫基因组中各功能基因的功能提供了新的技术方案，具有广泛的应用前景。 | ||
| 搜索关键词： | 可控 基因组 修饰 疟原虫 重组 表达 载体 构建 方法 应用 | ||
【主权项】：
1.一种重组表达载体，其特征在于，包括长同源臂和短同源臂以及位于所述长同源臂与所述短同源臂之间的四环素阻遏蛋白基因表达框、乙胺嘧啶抗性基因表达框以及目的基因表达框；其中，所述目的基因表达框中含有目的基因启动子以及目的基因；所述目的基因启动子是疟原虫ef1αa启动子，其序列如SEQ ID No.1所示，所述目的基因启动子的‑205位点、‑184位点以及‑163位点中的至少一个位点处插入有四环素操纵基因序列；所述目的基因选自疟原虫基因组中功能基因编码序列中的一种，所述功能基因为疟原虫基因组中的HT1基因、DHODH基因、Lp1A1基因、OMD基因、SUB1基因、Rab11A基因或TrxR基因；所述长同源臂与短同源臂的序列为疟原虫基因组中与所述功能基因对应的DNA序列。
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