[发明专利]一种检测超氧阴离子自由基含量的方法

摘要

本发明公开了一种检测超氧阴离子自由基含量的方法。首先合成了噻吩‑2‑甲醛缩L‑半胱氨酸席夫碱，利用水相合成法制备了β‑巯基乙胺（CA）稳定的CdTe量子点，利用合成的噻吩‑2‑甲醛缩L‑半胱氨酸席夫碱对CA‑CdTe量子点进行修饰，制得一种检测超氧阴离子自由基的荧光探针，检测条件下，CA‑CdTe量子点修饰了噻吩‑2‑甲醛缩L‑半胱氨酸席夫碱后，其荧光强度有显著降低，而加入了超氧阴离子自由基后荧光强度有明显增加，超氧阴离子自由基浓度在0 – 1.0×10‑4mol/L呈线性关系。本发明对超氧阴离子自由基浓度的检测具有较高的选择性和稳定性。

主权项

一种检测超氧阴离子自由基含量方法，其特征在于具体步骤为：（1）称取0.02g NaOH固体溶于1mL超纯水中，配制成浓度为0.5mol/L的NaOH溶液；（2）将100μL步骤（1）配好的NaOH溶液，滴加到10mL分析纯二甲基亚砜中，配成5mmol/L NaOH的二甲基亚砜溶液，溶液中的含水量体积百分比为1%；磁力搅拌下与空气反应30分钟，制得超氧阴离子自由基，密封待用，超氧阴离子自由基的浓度通过朗伯比尔定律计算得出，其中在分析纯二甲基亚砜中的摩尔吸收系数为20.061（mol/L）‑1 cm‑1 ，波长为271nm，再根据需要，用分析纯二甲基亚砜稀释成不同浓度的超氧阴离子自由基溶液；（3）将20mL超纯水和0.242 g L‑半胱氨酸倒入三口瓶中；（4）将10mL无水乙醇和0.224g噻吩‑2‑甲醛混合；（5）磁力搅拌下在步骤（3）所得溶液中缓慢滴加步骤（4）所得溶液，25℃水浴条件下磁力搅拌反应12小时，有土黄色沉淀缓慢生成，过滤，沉淀用超纯水洗涤2‑3次，得到噻吩‑2‑甲醛缩L‑半胱氨酸席夫碱，干燥待用；（6）在装有100mL超纯水的三口瓶中混合0.2284g CdCl2·H2O和0.2315gβ‑巯基乙胺，通入氮气，磁力搅拌升温至200℃，加入0.0798g TeO2和0.027g KBH4，溶液变色后，迅速取出，冷却，获得CA‑CdTe量子点溶液，密封，3℃下保存；（7）将0.04g步骤（5）制得的噻吩‑2‑甲醛缩L‑半胱氨酸席夫碱溶于30mL分析纯 N,N‑二甲基甲酰胺中，用分析纯三乙胺调pH = 9，转入三口瓶中，搅拌下加入0.049g N‑羟基丁二酰胺，30分钟后加入0.04g N,N’‑二环己基碳二亚胺，25℃下活化24小时，加入6mL步骤（6）所得的CA‑CdTe量子点溶液，继续反应24小时，以保证CA‑CdTe量子点与噻吩‑2‑甲醛缩L‑半胱氨酸席夫碱的稳定结合，获得CA‑CdTe‑席夫碱复合体系，将CA‑CdTe‑Schiff复合体系在85℃下旋转蒸发，回收底液，冷却后，加入等体积的无水乙醇，阴凉条件下放置12小时，有CA‑CdTe‑席夫碱复合物从溶液中沉淀析出，再用无水乙醇进一步洗涤以除去未反应的CdTe量子点和席夫碱，再次旋转蒸发，回收底液，离心，干燥得到CA‑CdTe‑席夫碱复合物固体；（8）将步骤（7）制得的CA‑CdTe‑席夫碱复合物固体溶解在3mL分析纯N,N‑二甲基甲酰胺中，配成CA‑CdTe‑席夫碱复合物的N,N‑二甲基甲酰胺溶液，取步骤（2）配制好的不同浓度的超氧阴离子自由基溶液各0.1mL，分别加入0.9mLCA‑CdTe‑席夫碱复合物的N,N‑二甲基甲酰胺溶液，最后分别用分析纯N,N‑二甲基甲酰胺稀释成10mL溶液，再分别超声波分散15分钟，再分别将混合物平衡30分钟后进行荧光测试，测试条件为激发和发射狭缝均设为5nm，激发波长为303nm，发射波长为610.4nm，在室温下进行，结果表明，随着超氧阴离子自由基浓度的增加，CA‑CdTe‑席夫碱复合体系的荧光强度有显著的增加，超氧阴离子自由基浓度在0‑1.0×10‑4mol/L呈线性关系，线性方程为y = 552.29χ+ 4958.7，其中：y为荧光值，χ为超氧阴离子自由基浓度，相关系数R=0.9615，检出限为1.8×10‑6mol/L；（9）将步骤（7）所得的CA‑CdTe‑席夫碱复合物固体溶解在3mL分析纯N,N‑二甲基甲酰胺中，配成CA‑CdTe‑席夫碱复合物的N,N‑二甲基甲酰胺溶液，取超氧阴离子自由基浓度在0‑1.0×10‑4mol/L内的待测样品各0.1mL，分别加入0.9mLCA‑CdTe‑席夫碱复合物的N,N‑二甲基甲酰胺溶液，最后分别用分析纯N,N‑二甲基甲酰胺稀释成10mL溶液，分别超声波分散15分钟，再分别将混合物平衡30分钟后进行荧光测试，测试条件为激发和发射狭缝均设为5nm，激发波长为303nm，发射波长为610.4nm，在室温下进行荧光强度测定，并代入线性方程y = 552.29χ+ 4958.7计算待测样品中超氧阴离子自由基浓度，计算相对误差。