[发明专利]一种气单胞菌脉冲场凝胶电泳分型方法

摘要

本发明公开了一种气单胞菌脉冲场凝胶电泳分型方法，旨在提供一种快捷、简便，图像结果优质凝胶电泳分型方法；其技术方案：将采集分离到的气单胞菌在TSA平板上、37℃条件下培养14-18小时，用无菌接种环刮取单菌落于CSB缓冲液中，制成5-6Mcf的细菌悬浊液；配制凝胶溶液；取细菌悬浊液于离心管中，加入的蛋白酶K，SDS，混匀后再加入凝胶溶液，得到混合溶液；将得到的混合溶液注入成胶模具，在室温下凝固30分钟，得到胶块；制备消化液，将步骤得到的胶块放入步骤的消化液中，消化裂解；洗胶块；胶块内DNA酶切；加样；电泳；获取图像分析。

主权项

一种气单胞菌脉冲场凝胶电泳分型方法，其特征在于，依次包括下述步骤： 1)胶块的制备 1.1)将采集分离到的气单胞菌在TSA平板上培养14‑18小时，用无菌接种环刮取单菌落于CSB缓冲液中，制成5‑6Mcf的细菌悬浊液； 1.2)配制凝胶溶液； 1.3)取步骤1.1)所述的细菌悬浊液于离心管中，加入的蛋白酶K，SDS，混匀后再加入步骤1.2)中的凝胶溶液，吹打均匀，得到混合溶液； 1.4)将步骤1.3)得到的混合溶液注入成胶模具，在室温下凝固30分钟，得到胶块； 2)胶块消化裂解 2.1)制备消化液， 2.2)将步骤1.4)得到的胶块放入步骤2.1)的消化液中，盖上滤筛盖，消化裂解； 3)洗胶块 4)胶块内DNA酶切： 4.1)将20μL的XbaI限制性内切酶10×缓冲液加入180μL的超纯水中配成酶切缓冲液； 4.2)将洗涤后胶块切成大小为2mm×4mm，放入装有步骤1)酶切缓冲液的离心管中并置于冰上30分钟； 4.3)吸出步骤4.2)中的酶切缓冲液，在离心管中加入已混匀的含有75U XbaI、20μL BSA、20μL XbaI限制性内切酶10×缓冲液和155μL超纯水的酶切液，在37℃水浴锅中孵化3小时； 5)加样 6)电泳 在电泳槽中加入TBE缓冲液，待电泳缓冲液恒定为12‑15℃后，将步骤5)制好的胶块放于电泳槽中进行电泳。 7)获取图像分析。