[发明专利]一种人类结肠癌细胞外基质体外模型及其制备方法

摘要

本发明提供一种人类结肠癌细胞外基质体外模型及其制备方法，该模型为冻干、无菌、无细胞毒性物质残留的多孔膜状，其完全去除细胞成分、并完整保留细胞外基质的成分和结构。制备方法包括：取离体4小时以内的人类结肠癌或直肠癌组织，前置处理；在恒温摇床中采用低浓度过氧乙酸-乙醇溶液灭菌；在清洗槽可振荡的恒温超声波清洗器中使用5～100mmol/L氢氧化钠溶液清洗30～90min进行脱细胞；将材料放于冷冻干燥机中，按照预先设计的冻干流程进行冷冻干燥成型；在无菌的状态下完成包装。该方法得到的人类结肠癌细胞外基质体外模型将结直肠癌细胞外基质分离出来单独研究，构建出结直肠癌微环境和EMT研究的理想体外和动物体内模型。

主权项

一种人类结肠癌细胞外基质体外模型的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)结肠癌组织标本的前置处理：取离体4小时以内的人类结肠癌或直肠癌组织，使用纯水冲洗3遍；(2)灭菌：采用低浓度过氧乙酸‑乙醇溶液法灭菌，该步骤在恒温摇床中进行，其中过氧乙酸的体积百分含量为0.05～0.2％，灭菌时间为1～2h，摇床振荡频率为30～600rpm，温度范围为4～40℃，然后在磷酸盐缓冲液中清洗2～5次，每次15min，检测清洗后的磷酸盐缓冲液的pH值，当pH达到6.5‑7.5后，以流动的注射用水清洗材料，检测电导率达到1.5um/s以下时终止；(3)脱细胞：在清洗槽可振荡的恒温超声波清洗器中进行，首先将材料置入清洗槽中，在清洗槽中注入氢氧化钠溶液，开启清洗器，清洗时间为30～90min，氢氧化钠溶液浓度为5～100mmol/L，然后关闭清洗器，将氢氧化钠溶液倾出，注入磷酸盐缓冲液，开启清洗器，清洗时间为10～30min，PBS清洗重复2～5次，检测清洗后的磷酸盐缓冲液的pH值，当pH达到6.5‑7.5后，流动的注射用水清洗材料，检测电导率达到1.5um/s以下时终止；(4)成型：将材料放于冷冻干燥机中，按照预先设计的冻干流程进行冷冻干燥：预冻至‑25～50℃，保温0.5～4小时，升温至15℃，保温4～12小时，升温至15℃，保温0.5～4小时，升温至25℃，保温4小时；(5)包装灭菌：在无菌的状态下进行包装，一层采用特卫强纸、另一层采用聚乙烯塑料，包装完成后采用环氧乙烷进行灭菌。