[发明专利]制备DC‑CTL的试剂盒及其应用

摘要

本发明公开了一种制备DC‑CTL的试剂盒及其应用，所述制备DC‑CTL的试剂盒包括分离单个核细胞的试剂；诱导DC分化成熟的试剂；致敏DC的肿瘤抗原活性表位肽；促进CTL扩增和激活的试剂，所述促进CTL扩增和激活的试剂为抗CD3单克隆抗体、IFN‑γ、IL‑1α、PHA、IL‑2、IL‑7中的一种或者几种与抗CD28单克隆抗体、抗ICOS单克隆抗体的组合。本发明制备CTL无需使用流式细胞仪或免疫磁珠从外周血单个核细胞中分选出CD8+T细胞，利用本发明方法制备的CTL纯度高，增殖力强，数量多，对肿瘤细胞的杀伤活性高。

主权项

一种制备DC‑CTL 的试剂盒制备DC‑CTL 的方法，其特征在于，所述DC‑CTL 的试剂盒，包括：分离单个核细胞的试剂；诱导DC 分化成熟的试剂；致敏DC 的肿瘤抗原活性表位肽；促进CTL 扩增和激活的试剂，所述促进CTL 扩增和激活的试剂为抗CD3 单克隆抗体、IFN‑γ、IL‑1α、PHA、IL‑2、IL‑7 中的一种或者几种与抗CD28 单克隆抗体、抗ICOS 单克隆抗体的组合；所述诱导DC 分化成熟的试剂为细胞因子IL‑4、GM‑CSF、TNF‑α中的一种或者几种；IL‑4、GM‑CSF、TNF‑α的浓度分别为400‑600U/mL、800‑1200U/mL、800‑1200U/mL；所述促进CTL 扩增和激活的试剂中抗CD3 单克隆抗体、IFN‑γ、IL‑1α、PHA、IL‑2、IL‑7 的浓度分别为50‑80ng/mL、1000‑1200U/mL、80‑150U/mL、50‑100ng/mL、300‑500U/mL、20‑30ng/mL ；所述抗CD28 单克隆抗体、抗ICOS 单克隆抗体的浓度分别为20‑50ng/mL、20‑40ng/mL，抗ICOS单克隆抗体添加在抗CD28 单克隆抗体后；所述方法包括以下步骤：A) 使用分离单个核细胞的试剂分离单个核细胞；B) 使用诱导DC 分化的试剂诱导外周血单个核细胞向DC分化；C) 使用肿瘤抗原活性表位肽致敏DC, 然后刺激DC成熟；D) 使用促进CTL扩增和激活的试剂扩增外周血单个核细胞中的T淋巴细胞，并诱导T淋巴细胞向CTL分化与增殖；所述分离单个核细胞的试剂为Ficoll淋巴细胞分离液，或者percoll细胞分离液；所述致敏DC 的肿瘤抗原活性表位肽为gp100 ：209‑217、HER2 ：369‑377的组合；所述步骤C) 在DC培养过程中先加入肿瘤抗原活性表位肽致敏，1‑2h后再添加TNF‑α促成熟；所述步骤D) 中添加抗CD28单克隆抗体以及添加抗ICOS单克隆抗体的顺序为：添加抗CD28 单克隆抗体1.5‑3h后再添加抗ICOS单克隆抗体。