[发明专利]一种城市河水污染治理的复合微生物制剂及其制备方法

摘要

本发明涉及一种城市河水污染治理的复合微生物制剂及其制备方法。包括如下微生物菌剂，均为体积份：嗜酸乳杆菌制剂、热带假丝酵母菌剂、枯草芽孢杆菌制剂；将上述菌剂混合均匀后，即得复合微生物制剂。本发明制得的城市河水污染治理的复合微生物制剂，有效活菌数量大于或等于40亿CFU/克，适于城市河道河水COD和氨氮含量超标、河水污浊、发臭等污染的修复与治理，其可快速修复水体生态环境，防止水体二次污染，并能很快恢复水体的自净化功能，消解河底污泥，是一种高效、快速、低成本和可持续发展的生物治污产品。

主权项

城市河水污染治理的复合微生物制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：（1）取嗜酸乳杆菌，接种于固体培养基I中，经活化培养，制得活化嗜酸乳杆菌；然后将活化嗜酸乳杆菌接种于液体培养基I进行扩大培养；再接种于发酵培养基I中，经发酵培养制得菌体浓度不小于5.0×10⁹ CFU/mL的嗜酸乳杆菌制剂；所述的嗜酸乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号：1.1854；所述步骤（1）中，活化条件为：35～38℃活化培养45～50h；所述的固体培养基I组分如下，均为重量份：蛋白胨1份，酵母粉0.5份，柠檬酸铵0.2份，葡萄糖2份，硫酸镁0.054份，牛肉膏1份，磷酸氢二钾0.2 份，醋酸钠0.5份，硫酸锰0.025份，琼脂1.5份，水93.021份，自然pH值；所述步骤（1）中，扩大培养步骤如下：将活化嗜酸乳杆菌接种于液体培养基I中，在35～38℃培养45～50h，制得一级种子液；然后按照重量百分比5‑8%的接种量将一级种子液接种于液体培养基I中，在培养温度35～38℃、罐压为0.02MPa、搅拌速度为100～120rpm的条件下，培养24～30小时，制得嗜酸乳杆菌种子液；所述的液体培养基I组分如下，均为重量份：蛋白胨1份，酵母粉0.5份，柠檬酸铵0.2份，葡萄糖2份，硫酸镁0.054份，牛肉膏1份，磷酸氢二钾0.2 份，醋酸钠0.5份，硫酸锰0.025份，水94.521份，自然pH值；所述步骤（1）中，发酵培养步骤如下：将嗜酸乳杆菌种子液按照体积百分比7～10%的接种量接种于发酵培养基I中，在温度35～38℃，罐压为0.02MPa，搅拌速度为100～120，培养36～48h，制得嗜酸乳杆菌制剂；所述的发酵培养基I组分如下，均为重量份：糖蜜1～10份、红糖1～10份、葡萄糖1～3份、蛋白胨0.1～2份、磷酸氢二钾0.01～1份、氯化钠0.1～2份、水72～96.8份；（2）取热带假丝酵母菌，接种于固体培养基II中，经活化培养，制得活化热带假丝酵母菌；然后将活化热带假丝酵母菌接种于液体培养基II进行扩大培养；再接种于发酵培养基II中，经发酵培养制得菌体浓度不小于1.0×10⁹ CFU/mL的热带假丝酵母菌制剂；所述的热带假丝酵母菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种编号：2.2735；所述步骤（2）中，活化条件为：28～30℃活化培养45～50h；所述的固体培养基II每升组分如下：马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉15g，水定容至1L；所述步骤（2）中，扩大培养步骤如下：将活化热带假丝酵母菌接种于液体培养基II中，在28～30℃、通风比为1∶1、罐压0.02MPa，搅拌速度为180～200rpm，培养36～48h，制得热带假丝酵母菌种子液；所述的液体培养基II组分如下，均为重量份：糖蜜1～10份，红糖3～5份，10～15波美度的麦芽汁4～6份，水79～92份；所述步骤（2）中发酵培养步骤如下：将热带假丝酵母菌种子液按照体积百分比5～8%的接种量接种于发酵培养基II中，在温度28～30℃，通风量为1∶1，罐压为0.02MPa，搅拌速度为180～200rpm，培养36～48h，制得热带假丝酵母菌制剂；所述的发酵培养基II组分如下，均为重量份：糖蜜1～10份，红糖3～5份，10～15波美度的麦芽汁4～6份，水79～92份；（3）取枯草芽孢杆菌，接种于固体培养基III中，经活化培养，制得活化枯草芽孢杆菌；然后将活化枯草芽孢杆菌接种于液体培养基III进行扩大培养；再接种于发酵培养基III中，经发酵培养制得菌体浓度不小于1.0×10¹⁰ CFU/mL的枯草芽孢杆菌制剂；所述的枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）YYW‑1，来源于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，菌种保藏编号：CGMCC NO.2396；所述步骤（3）中，活化条件为：35～38℃活化培养34～40h；所述的固体培养基III每升组分如下：蛋白胨10克，酵母膏5克，氯化钠10克，琼脂粉15克，水定溶至1L；将活化枯草芽孢杆菌接种于液体培养基III中，在35～38℃、通气量以发酵液体积m³/空气体积m³·分钟计为1∶（1.1～1.2）、罐压0.02MPa，搅拌速度为220～260rpm，培养12～16h，制得枯草芽孢杆菌种子液；所述的液体培养基III组分如下，均为重量份：玉米粉0.5～4份、豆饼粉0.5～5份、麸皮粉0.5～3份、氯化钠0.01～0.2份、氯化镁0.01～0.2份、硫酸锰0.01～0.5份，水87.1～98.5份；所述步骤（3）中发酵培养步骤如下：将枯草芽孢杆菌种子液按照体积百分比7～10%的接种量接种于发酵培养基III中，在温度35～38℃，通风量为1∶1，罐压为0.02MPa，搅拌速度为200～240 rpm，培养32～48h，制得枯草芽孢杆菌制剂；所述的发酵培养基III组分如下，均为重量份：玉米粉0.5～4份、豆饼粉0.5～5份、麸皮粉0.5～3份、氯化钠0.01～0.2份、氯化镁0.01～0.2份、硫酸锰0.01～0.5份，水87.1～98.5份；（4）将步骤（1）制得的嗜酸乳杆菌制剂、步骤（2）制得的热带假丝酵母菌制剂和步骤（3）制得的枯草芽孢杆菌制剂按比例混合后，制得城市河水污染治理的复合微生物制剂；嗜酸乳杆菌制剂、热带假丝酵母菌制剂和枯草芽孢杆菌制剂按如下体积份混合：嗜酸乳杆菌制剂40～60份、热带假丝酵母菌剂20～30份、枯草芽孢杆菌制剂10～20份。