[发明专利]兔血中白蛋白的纯化制备方法在审

专利信息
申请号: 201410454603.9 申请日: 2014-09-09
公开(公告)号: CN104231074A 公开(公告)日: 2014-12-24
发明(设计)人: 葛安山;刘晓明;荆荣燕 申请(专利权)人: 青岛康大食品有限公司;青岛中创生物科技有限公司
主分类号: C07K14/765 分类号: C07K14/765;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/16
代理公司: 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369 代理人: 史霞
地址: 266400 山东*** 国省代码: 山东;37
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摘要: 发明公开了一种兔血中白蛋白的纯化制备方法,主要包括如下工艺步骤:(1)兔血前处理;(2)滤出液脱盐;(3)兔血白蛋白的分离;(4)层析;(5)超滤。该方法操作简单,提取的白蛋白纯度高,提取白蛋白纯度可达99%,与传统方法比较,提取效率可提高25%。
搜索关键词: 兔血中 白蛋白 纯化 制备 方法
【主权项】:
兔血中白蛋白的纯化制备方法,其特征在于:主要包括如下工艺步骤:(1) 兔血前处理a. 将50L新鲜兔血按16:1的比例加入4.0%的枸橼酸钠(柠檬酸钠)溶液中,并搅匀;b. 连续流离心机离心,离心力约为400g,离心上清为血浆,沉淀物为血球等细胞,收集上清;c. 将收集的上清通过深层滤器,收集滤出液;(2) 滤出液脱盐采用G25脱盐层析,将20L的滤出液通过上样管路上样,待上样完成后切至进液管路,当紫外检测器检测到蛋白流出时,切换至收集管路,直至紫外检测器信号值为其峰值的1/10,切换至废液,直至紫外检测器信号为平,重复上样;(3) 兔血白蛋白的分离a. 冷沉淀:将G25脱盐柱的收集液置于4℃的环境中过夜,其会析出大量的沉淀物,该沉淀物即为兔凝血酶原和其他蛋白质的混合物;b. 离心:将冷沉淀的溶液在4℃的条件下,离心约30min,收集上清液;(4) 层析a. 将步骤(3)中收集的上清液通过上样管路上样,待上样完成后切至进液管路,收集穿透液;所述层析柱为450*200,填料为DEAE 6FF,装填高度为15cm,约需要22L填料;Buffer A:15mM HAc‑NaAc,pH为 5.2;Buffer B:25mM NaAc ,pH为 4.5;b. 将a中收集的穿透液通过上样管路上样,待上样完成后切至进液管路,收集二次穿透液;所述层析柱为450*200,填料为CM,装填高度为15cm,约需要22L填料;Buffer A:25mM HAc‑NaAc,pH 为4.5;Buffer B:25mM NaAc + 0.25M NaCl ,pH为 5.5;(5) 超滤在进液口放入兔血白蛋白洗脱液中(pH为7.0),待兔血白蛋白洗脱液体积约为之前的1/10时,关闭超滤系统,收集进液管路和回流管路中的兔血白蛋白洗脱液;将膜包用0.1M NaOH冲洗30min,再用水冲洗直至pH约为7,将膜包取出并置于保存液中。
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