[发明专利]一种快速检测生物表面活性剂产量的方法

摘要

本发明公开了一种快速检测生物表面活性剂产量的方法，该方法包括以下步骤：培养微生物，得到微生物发酵液；制备上清液；测定吸光光度值A640和A550；根据吸光值的变化计算比色响应值；通过建立生物表面活性剂浓度与比色响应值的标准曲线，即可由发酵样品的比色响应值定量生物表面活性剂的产量，确定生物表面活性剂的产量。本发明比色过程可于酶标仪的酶标板内进行，试剂用量少，成本低，检测速度快、数量多，有效地提高了检测效率。可广泛地应用于生物表面活性剂检测领域中。

主权项

一种快速检测生物表面活性剂产量的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)培养微生物将产生物表面活性剂的菌种在发酵培养基中培养，接种量为2％～5％(V/V)，培养温度30℃～37℃，转速180～200rpm，培养时间24～48h，得到微生物发酵液；(2)制备上清液将1.5mL上述发酵液5000rpm离心5min，14000rpm离心5min，取300uL上清液加入2mL离心管，然后加1.2mL甲醇，5000rpm离心5min，14000rpm离心5min，用1mL针管取上清液过0.45um有机滤膜，得到上清液；(3)测定吸光光度值取75uL菌液上清和150uL聚联乙炔囊泡溶液于2mL离心管中，25‑30℃水浴中反应10min，然后加到96孔板中，用酶标仪分别检测640nm和550nm的吸光值，即A640和A550；(4)计算比色响应值CR％比色响应值CR％计算公式为：CR％＝[(PB0‑PBf)/PB0]×100％其中：PB＝A640/(A640+A550)；PB0是囊泡颜色改变前的值；PBf是外界刺激体系颜色发生改变后的值；(5)确定生物表面活性剂的产量取生物表面活性剂标品配制成浓度为1g/L的母液，分别稀释到50、100、150、200、250、300、400、500mg/L，分别取75uL各浓度溶液于2mL离心管中，再加入150uL聚联乙炔囊泡溶液，25～30℃水浴中反应10min，然后加到96孔板中，用酶标仪分别检测640nm和550nm的吸光值，计算比色响应值CR％，以CR％值为纵坐标，表面活性剂浓度为横坐标，通过线性回归处理得到标准曲线，发酵样品取三份平行样分别测定吸光值，按照公式计算比色响应值CR％，最终求得比色响应值的平均值，代入标准曲线方程即可得到发酵液中生物表面活性剂的产量。