[发明专利]一种偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶及其应用

摘要

本发明公开了一种偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶，所述凝胶是将Stat3抗体偶联至琼脂糖凝胶载体上制成偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶；所述Stat3抗体是由Stat3抗原多肽经免疫反应后进行提取纯化而获得，所述Stat3抗原多肽的氨基酸序列为序列2、序列3、序列5、序列8和序列9之一所示；本发明所述Stat3抗体灵敏性好，效价高；本发明中所得到的偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶可以直接富集细胞中的Stat3蛋白及其Stat3结合蛋白，用于Stat3蛋白相关疾病中的功能研究；序列2：DFDFNYKTLKSQGC；序列3：PEADPGSAAPYLKT；序列5：LYPDIPKEEAFGKY；序列8：ESQEHPEADPGSAAPY；序列9：KVSYKGDPIVQHRP。 1

主权项

1.一种偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶，其特征在于所述凝胶是将Stat3抗体偶联至琼脂糖凝胶载体上制成偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶；所述Stat3抗体是由Stat3抗原多肽经免疫反应后进行提取纯化而获得，所述Stat3抗原多肽的氨基酸序列为序列3所示；

序列3：PEADPGSAAPYLKT。

2.如权利要求1所述偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶，其特征在于所述琼脂糖凝胶为NHS活化的琼脂糖凝胶FF。

3.如权利要求1所述偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶，其特征在于所述偶联方法为：将Stat3抗体用pH8.0的0.2M碳酸氢钠水溶液溶解制成10mg/ml偶联溶液；将琼脂糖凝胶用1mM盐酸水溶液抽滤清洗后，获得载体；将载体加入偶联溶液中，4℃，震荡反应12小时，抽滤，滤饼用pH8.0的0.2M碳酸氢钠水溶液清洗后浸入10mM乙醇胺溶液中，室温震荡过夜，抽滤后用pH8.0，0.2M碳酸钠缓冲液清洗，去除洗涤液即获得偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶；所述10mM乙醇胺溶液是由pH8.0、0.2M碳酸钠缓冲液配制，所述的载体与偶联溶液的体积比为1：1.5～2，所述琼脂糖凝胶为NHS活化的琼脂糖凝胶FF。

4.如权利要求1所述偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶，其特征在于Stat3抗体按如下方法制备：(1)将Stat3抗原多肽与载体偶联，制成Stat3抗原多肽复合物；(2)用Stat3抗原多肽复合物进行免疫反应，收集含Stat3抗体的血清，分离提取Stat3抗体，获得Stat3抗体。

5.如权利要求4所述偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶，其特征在于步骤(1)所述载体为钥孔血蓝蛋白。

6.一种权利要求1所述偶联Stat3抗体的琼脂糖凝胶在富集Stat3蛋白及其结合蛋白中的应用。