[发明专利]β‑葡萄糖苷酶磁性分子印迹材料及其在知母皂苷BII转化中的应用

摘要

本发明提供一种β‑葡萄糖苷酶磁性分子印迹材料，以β‑葡萄糖苷酶为模板分子，聚乙烯‑乙烯醇为交联剂，通过聚乙烯‑乙烯醇相转化法制备。制备方法简单，避免了繁琐的直接聚合方法，制备过程可控，水解效率明显提高。本发明还提供一种转化知母皂苷BII的方法，其使用所述的β‑葡萄糖苷酶磁性分子印迹聚合物水解知母皂苷BII为知母皂苷AⅢ。

主权项

一种转化知母皂苷BII的方法，其特征在于使用β‑葡萄糖苷酶磁性分子印迹聚合物水解知母皂苷BII为知母皂苷AⅢ,所述转化的步骤为：称取知母皂苷BII 20mg，β‑葡萄糖苷酶的磁性分子印迹聚合物25mg，加入pH4.8乙酸‑乙酸钠缓冲溶液20mL，于55℃反应2h；所述β‑葡萄糖苷酶磁性分子印迹聚合物的制备方法为：i)在乙二醇中溶解FeCl3·6H2O形成黄色溶液，在上述溶液中加入乙酸钠和聚乙二醇2000，200℃下反应，至反应完成后，用无水乙醇和去离子水分别洗涤后干燥后得Fe3O4磁性纳米粒子；ii)将步骤i)的磁性纳米粒子加热加入油酸对Fe3O4磁性纳米粒子进行改性，反应完成后将溶液冷却至室温，用蒸馏水反复洗涤油酸包裹的Fe3O4直至pH＝7，然后在200℃真空下干燥，即得黑色的油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子；iii)取以DMSO为溶剂的聚乙烯‑乙烯醇澄清溶液，将β‑葡萄糖苷酶溶解在上述溶液中，然后加入步骤ii)制备的Fe3O4磁性纳米粒子，室温下搅拌混匀；每次取0.5mL含有酶的DMSO/EVAL溶液分散在10mL的分散剂中，所述分散剂组成为：用4mL的去离子水和6mL的异丙醇组成水‑异丙醇混合液为分散剂，可得磁性分子印迹聚合物；iv)用0.1％的SDS溶液和去离子水洗步骤iii)获得的磁性分子印迹聚合物，在pH＝4.8的乙酸‑乙酸钠缓冲溶液中进行重吸附，然后在磁场条件下分离获得固定β‑葡萄糖苷酶的磁性分子印迹聚合物。