[发明专利]一种具有免疫活性的新型红托竹荪多糖及其制备方法和应用

摘要

本发明公开一种具有免疫活性的新型红托竹荪多糖及其制备方法和应用，所述方法，以红托竹荪为原料，经过如下方法制备热水浸提、Savege法除蛋白、乙醇沉淀，然后采用离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析、超滤分离、凝胶过滤柱层析四步分离法分离纯化后获得。本发明的制备工艺合理简单，并且易于实现工业化大生产。本发明制备的新型红托竹荪多糖具有良好的免疫促进作用，可以作为肿瘤等免疫功能底下疾病的辅助治疗药物或者作为具有提高免疫力作用的功能性保健食品或食品。

主权项

一种具有免疫活性的红托竹荪多糖的制备方法，其特征在于，以红托竹荪为原料，经过如下方法制备：热水浸提、Savege法除蛋白、乙醇沉淀，然后采用离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析、超滤分离、凝胶过滤柱层析四步分离法分离纯化后获得；所述方法包括下列步骤：（1）将红托竹荪子实体于40 ~ 70 ℃干燥0.5 ~ 4 h，然后用打粉机粉碎；（2）热水浸提1 ~ 4 h，料液比为1 : 20 ~ 1 : 40 g/mL，温度为60 ~ 100 ℃，浸提次数为1 ~ 3次；（3）采用Sevage法对热水浸提物进行脱蛋白处理6 ~ 10次，收集上层多糖溶液然后进行浓缩和干燥，得到脱除蛋白后的粗多糖；（4）往脱除蛋白后的粗多糖的溶液中加入乙醇溶液，于0 ~ 4 ℃下静置过夜，4000 ~ 8000 r/min离心10 ~ 20 min，收集沉淀物，真空冷冻干燥后得到红托竹荪粗多糖；（5）采用四步分离法进行分离纯化：分离纯化步骤为：首先采用离子交换柱层析对步骤（4）得到的红托竹荪粗多糖进行纯化，用去离子水和0.05 ~ 2 mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，分别收集去离子水的洗脱液DP1和NaCl溶液的洗脱液DP2，透析、浓缩后冷冻干燥；然后分别采用凝胶过滤柱层析，以去离子水作洗脱剂，透析、浓缩后冷冻干燥；再分别采用超滤分离技术进行纯化，DP1收集截留液，DP2收集透过液浓缩后冷冻干燥；最后分别采用凝胶过滤柱层析，以去离子水作洗脱剂，透析、浓缩后冷冻干燥，得到红托竹荪多糖；步骤（5）中，采用离子交换柱层析、凝胶过滤柱层析、超滤分离、凝胶过滤柱层析四步分离法进行分离纯化，四步分离法的实施方式为如下方式中的一种：方式一，采用DEAE‑52或 DEAE Sepharose FF阴离子交换柱层析， Sephadex G‑200或Sephadex G‑150凝胶过滤柱层析，超滤分离，Sephadex G‑100凝胶过滤柱层析；方式二，采用QA 52阴离子交换柱层析，Sephadex G‑200或Sephadex G‑150凝胶过滤柱层析，超滤分离，Sephadex G‑100凝胶过滤柱层析；方式三，DEAE‑52或Sepharose XL阴离子交换柱层析，Sephadex G‑200或Sepharose Fast Flow凝胶过滤柱层析，超滤分离， Superose 12或Bio‑Gel P‑4凝胶过滤柱层析；方式四，Sepharose XL或CM52阴离子交换柱层析，Sepharose 2B或Sepharose 4B凝胶过滤柱层析，超滤分离，Sepharose 6B或Sephacryl S‑400 HR凝胶过滤柱层析。