[发明专利]一种尿嘧啶-DNA糖基化酶活性测定方法在审
申请号: | 201410502151.7 | 申请日: | 2014-09-28 |
公开(公告)号: | CN104293927A | 公开(公告)日: | 2015-01-21 |
发明(设计)人: | 徐晓昱;刘来花;王静 | 申请(专利权)人: | 南京诺唯赞生物科技有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/48;C12Q1/34 |
代理公司: | 南京正联知识产权代理有限公司 32243 | 代理人: | 王素琴 |
地址: | 210014 江苏省*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明公开了一种尿嘧啶-DNA糖基化酶活性测定方法,所述方法包括如下步骤:首先是PCR扩增反应:以双链DNA为模板,在dU/A/G/CTP混合物和引物存在下,利用聚合酶进行聚合反应,进行扩增,生成含有dU的扩增产物UDNA双链;其次是尿嘧啶-DNA糖基化酶反应:扩增产物经受尿嘧啶-DNA糖基化酶作用,形成大量碱基缺失的DNA链;最后测定反应体系中单链DNA产物或UDNA双链的相对量,并根据测定结果推导出尿嘧啶-DNA糖基化酶活性程度,其中尿嘧啶-DNA糖基化酶活性程度与反应体系中UDNA双链的量成反比,而与单链DNA产物的量成正比。本发明方法无放射性污染,操作简单便捷,灵敏度高,可以定量检测,并且稳定。 | ||
搜索关键词: | 一种 嘧啶 dna 糖基化酶 活性 测定 方法 | ||
【主权项】:
一种尿嘧啶‑DNA糖基化酶活性测定方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:首先是PCR扩增反应:以双链DNA为模板,在dU/A/G/CTP混合物和引物存在下,利用聚合酶进行聚合反应,进行扩增,生成含有dU的扩增产物UDNA双链;其次是尿嘧啶‑DNA糖基化酶反应:扩增产物经受尿嘧啶‑DNA糖基化酶作用,形成大量碱基缺失的DNA链;最后测定反应体系中单链DNA产物或UDNA双链的相对量,并根据测定结果推导出尿嘧啶‑DNA糖基化酶活性程度,其中尿嘧啶‑DNA糖基化酶活性程度与反应体系中UDNA双链的量成反比,而与单链DNA产物的量成正比。
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