[发明专利]一种鼠肝炎病毒的复合型检测试剂盒、检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种鼠肝炎病毒的复合型检测试剂盒及检测方法，选取鼠肝炎病毒主要亚型的共同特有的核酸恒定区而设计特异性核酸探针，选取6种鼠肝炎病毒的主要亚型(MHV-1、MHV-2、MHV-3、JHM、A59和S)的共同特有的结构蛋白S稳定区S2基因序列设计引物。采用一步法反转录聚合酶链式反应技术对鼠肝炎病毒的核酸进行检测；通过基因克隆和表达而生物合成鼠肝炎病毒的S2蛋白，并利用此特异性抗原筛选噬菌体抗体库，获得相应的单克隆抗体。在此基础上,利用酶联免疫吸附技术检测鼠肝炎病毒的抗原和鼠自身产生的抗体。本发明的复合型试剂盒及其检测方法，具有检测结果准确、灵敏度高、特异性强、成本低、操作简便等特点。

主权项

一种鼠肝炎病毒的复合型检测试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有： (1)一步法反转录聚合酶链式反应试剂，其中包括焦磷酸核苷酸混合物、五倍反应缓冲液、鼠肝炎病毒探针、无核糖核酸酶去离子水、酶混合液、磷酸盐缓冲液、阳性对照品和阴性对照品，所述鼠肝炎病毒探针包括鼠肝炎病毒探针Ⅰ、鼠肝炎病毒探针Ⅱ、鼠肝炎病毒探针Ⅲ； 鼠肝炎病毒探针Ⅰ如序列表中的SEQ ID NO.1所示：5′‑GAGGATTACCATACACTAAC‑3′； 鼠肝炎病毒探针Ⅱ如序列表中的SEQ ID NO.2所示：5′‑AAGGTAGACGGTGTTAGCGG‑3′； 鼠肝炎病毒探针Ⅲ如序列表中的SEQ ID NO.3所示：5′‑TTTAACCCGCGCTCGGTTTG‑3′； (2)应用S2抗体的快速间接酶联免疫吸附技术检测试剂，其中包括应用S2抗体检测的阳性对照、应用S2抗体检测的阴性对照、S2抗体； 应用S2抗体检测的阳性对照为经试验检测含有鼠肝炎病毒抗原蛋白S2的稀释液； 应用S2抗体检测的阴性对照为经试验检测不含鼠肝炎病毒抗原蛋白S2的稀释液； S2抗体为抗原蛋白S2通过噬菌体抗体库筛选后生产获得的单克隆抗体； (3)应用抗原蛋白S2的快速双抗体夹心酶联免疫吸附技术检测试剂，其中包括应用抗原蛋白S2检测的阳性对照、应用抗原S2检测的阴性对照、S2蛋白稀释液； 应用抗原蛋白S2检测的阳性对照为经试验检测含有鼠肝炎病毒S2抗体的稀释液； 应用抗原蛋白S2检测的阴性对照为经试验检测不含鼠肝炎病毒S2抗体的稀释液； S2蛋白稀释液为溶于磷酸盐缓冲液中的S2抗原蛋白； (4)包被液； (5)洗涤液，包括洗涤液Ⅰ和洗涤液Ⅱ； (6)封闭液； (7)辣根过氧化物酶‑蛋白A偶联物； (8)酶反应底物； (9)终止液； (10)脱氧核糖核酸酶Ⅰ； (11)肝素。