[发明专利]一种快速高效测定马蔺半胱氨酸和谷胱甘肽含量的方法

摘要

一种快速高效测定马蔺半胱氨酸和谷胱甘肽含量的方法，属于分析测定技术领域。本研究利用超高效液相色谱（UPLC），对马蔺提取液中半胱氨酸（Cys）和谷胱甘肽（GSH）进行定性和定量分析选取Vydac C18色谱柱，流动相为0.1%的TFA（A）和100% ACN（B）；柱温30℃，流速为0.5ml·min‑1，进样量为1μl；梯度洗脱程序12%～25% ACN （3min）、25%～100% ACN（0.5min）；洗柱100% ACN（1.5min）；柱平衡100%～0% ACN（0.5min）和柱后流动时间1.5 min。荧光检测器条件为λex（激发波长）380nm、λem（发射波长）470 nm。以峰面积进行外标法定量，可以在7min内同时对Cys和GSH进行检测分析。本方法与传统高效液相色谱（HPLC）相比，分析过程大大缩短，分离效果良好，极大的提高了检测效率及节省流动相成本。

主权项

一种快速高效测定马蔺半胱氨酸和谷胱甘肽含量的方法，其特征在于：称取0.3g马蔺鲜样组织，液氮迅速冷冻后置于研钵中，加入1.75ml0.1％TFA和少量石英砂，其中TFA内含6.3mmol·L‑1DTPA，pH<1，冰浴上充分研磨离心，条件为4℃，12000g，20min，上清液冷藏用于Cys和GSH分析测定；分别取25μl标准液和植物组织上清液，分别依次加入45μl200mmol·L‑1HEPPS和1μl25mmol·L‑1mBBr，其中内含6.3mmol·L‑1DTPA，pH＝8.2，充分混合45℃反应，30min后加入30μl1mmol·L‑1MSA终止反应,摇匀转移至Agilent棕色顶空瓶内，4℃保存，直到UPLC分析测定；所用的色谱柱为VydacC18色谱柱，流动相为TFA‑ACN梯度洗脱，柱温30℃，流速0.5ml·min‑1；荧光检测器条件为：激发波长380nm、发射波长470nm；1～100ng·μl‑1浓度范围内半胱氨酸和谷胱甘肽浓度与峰面积呈良好的线性关系，可用于半胱氨酸和谷胱甘肽的定量测定；其中所述的梯度洗脱程序为：12％～25％ACN(3min)、25％～100％ACN(0.5min)；洗柱：100％ACN(1.5min)；柱平衡：100％～0％ACN(0.5min)和柱后流动时间：1.5min。