[发明专利]一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法

摘要

本发明是一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法，包括（1）酪蛋白凝胶的制备；（2）对待测物质进行蛋白酶活性的鉴定。酪蛋白凝胶制备时将酪蛋白加入到NaOH溶液，溶解成悬浊液后灭菌，加无菌蒸馏水混匀；取转谷氨酰胺酶溶解于水中，过滤；将酪蛋白溶液与酶溶液混匀，注入层析柱导液硬质塑料管内，形成酪蛋白凝胶。本发明通过将待测物溶液直接与酪蛋白凝胶共孵育，观察酪蛋白凝胶是否溶解，判断某种物质是否具有蛋白酶活性。本发明方法具有低成本、直观、简便的特点，为鉴定蛋白酶活性提供了极大方便。

主权项

一种简易式鉴定蛋白酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）酪蛋白凝胶的制备：称取6 g酪蛋白，加入到30 mL质量浓度为 0.8% 的NaOH溶液中，微波炉中中等火力溶解成悬浊液，然后放入高压蒸汽灭菌锅中121℃灭菌30 min，取出后再加入10 mL无菌蒸馏水，混匀得酪蛋白溶液；称取8 g转谷氨酰胺酶，溶解于20 ml水中，过滤除菌得酶溶液；将酪蛋白溶液与10 ml酶溶液混匀，注入外径2.0 mm、内径1 mm的层析柱导液硬质塑料管内，25 ℃保温过夜，形成酪蛋白凝胶，置于‑20 ℃长期保存；使用时，按一定长度切断装有酪蛋白凝胶的导管，直接放入待测物溶液中；或者使用注射器推注空气于装有酪蛋白凝胶的导管，将酪蛋白凝胶条推出后使用；（2）对待测物质进行纤维蛋白溶解活性的鉴定：通过将待测物溶液与酪蛋白凝胶块共孵育，观察酪蛋白凝胶是否水解，判断待测物是否具有蛋白酶活性，以及蛋白酶活性大小的比较。