[发明专利]辣椒灰霉病抗病性鉴定的苗期接种方法

摘要

本发明涉及一种辣椒灰霉病苗期接种鉴定方法，属于植物保护技术领域。技术要点为：培养灰霉病菌（Botrytis cinerea），收集病菌孢子，配制成10⁶/mL的灰霉菌孢子悬浮液，辣椒种子播种在灭菌的土壤中，置于20℃~25℃温室大棚内，待生长至四叶期后，在苗心生长点上滴加孢子液接种，小棚密闭保湿，21d后进行灰霉病调查。本发明的技术特点是：苗期鉴定，操作简便，高效快速，鉴定结果准确可靠。主要用于快速筛选辣椒资源品种中抗病性种质和品种的抗病性鉴定，为抗病新品种选育和抗病品种合理布局服务。

主权项

1.一种辣椒灰霉病抗病性鉴定的苗期接种方法，首先活化并培养灰霉病菌，配制分生孢子悬浮液；然后在灭菌基质中播种，培育接种用辣椒苗，滴加孢子悬浮液进行接种，辣椒苗的接种部位为苗心生长点，并使孢子悬浮液液滴悬挂于苗心；密闭保湿，21d后调查各鉴定材料的发病率，按以下标准进行抗性水平分类:等级抗病性发病率（%）1高抗（HR）≤1.02抗病（R）1.1‑10.03中抗（MR）10.1‑30.04中感（MS）30.1‑50.05感病（S）50.1‑70.06高感（HS）>70.0其中，活化并培养灰霉病菌，配制分生孢子悬浮液的具体过程为：从采集的病苗上用灭菌的接种针挑取少量霉层接种于PDA培养基平板中，于20℃培养2d，从菌落边缘挑取灰霉菌菌丝接入新的PDA培养基平板上，2d后再次将菌落边缘的菌丝转接，如此反复，直至培养基中长出的菌丝不含其它杂菌为止；将纯化后的灰霉菌菌丝接种至装有PDA培养基的无菌试管中，20℃培养至产生菌核后，保存于4℃条件下；使用前由保存试管中挑取菌核或菌丝块移至装有PDA培养基的无菌培养皿中央于20℃进行活化3‑5d，于菌落边缘用打孔器取新鲜菌丝块接入新PDA培养基上，20℃下黑暗培养14d后，用少量无菌水将灰霉菌分生孢子洗下，配成106/mL的孢子悬浮液待用；PDA培养基的配方为：200g土豆、20g蔗糖和15g琼脂粉，蒸馏水1L；其中，孢子悬浮液的接种量为30μL每株苗，辣椒苗的接种时期为四叶期。