[发明专利]一种重组蛋白A亲和配基的定点固定化方法有效
| 申请号： | 201410546621.X | 申请日： | 2014-10-15 |
| 公开（公告）号： | CN104356238B | 公开（公告）日： | 2018-01-09 |
| 发明（设计）人： | 贾凌云;臧柏林;任军;徐丽 | 申请（专利权）人： | 大连理工大学 |
| 主分类号： | C07K17/08 | 分类号： | C07K17/08;C07K17/04;B01D15/20 |
| 代理公司： | 大连东方专利代理有限责任公司21212 | 代理人： | 贾汉生,李馨 |
| 地址： | 116024 辽*** | 国省代码： | 辽宁;21 |
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| 摘要： | 本发明提供一种重组蛋白A亲和配基的定点固定化方法。该方法是通过基因工程手段将FGE识别基因序列插入到编码目的蛋白质的基因序列末端，构建该目的蛋白质的表达载体，再将目的蛋白质与FGE在大肠杆菌中共表达，实现目的蛋白质的胞内醛基催化转化。再通过介质表面的酰肼基团与蛋白质表面醛基的选择性反应实现定点固定化。本发明的方法能够将目的重组蛋白从细胞破碎上清中直接固定，条件温和，步骤简单，大大减少固定化的时间与成本。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 重组 蛋白 亲和 定点 固定 方法 | ||
【主权项】：
一种蛋白质亲和配基的定点固定化方法，其特征在于，该定点固定化方法包括如下步骤：(1)蛋白质基因序列末端加入SEQ ID NO.1所示的基因序列，得到的基因序列连接入表达载体I中，得目的蛋白表达载体；(2)将步骤(1)得到的目的蛋白表达载体和连接入FGE蛋白质基因序列的表达载体II同时转化至宿主细胞，诱导蛋白表达；(3)收集菌体，破碎菌体后离心，得细胞上清液；(4)将步骤(3)得到的细胞上清液和带有活性酰肼基或氧氨基的固相色谱基质混合，加入催化剂，在pH 7、25～40℃下反应12～14小时，其中所述的催化剂为苯胺；在步骤(1)中所述的蛋白质基因序列为编码蛋白A的基因序列；在步骤(4)中所述的细胞上清液和带有活性酰肼基或氧氨基的固相色谱基质的体积比为1:1～1:3；所述的催化剂在反应体系中的浓度为50～100mM。
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