[发明专利]一种提高绒毛白蜡组培快繁增殖率的方法

摘要

本发明公开了一种提高绒毛白蜡组培快繁增殖率的方法，是在组培苗快繁增殖培养过程中，以WPM培养基为基本培养基，利用4种植物生长调节剂不同浓度配比，大幅度提高了绒毛白蜡组培苗的增殖倍数；以大量元素减半的1/2WPM培养基为基本培养基，附加2种生长素和1种细胞分裂素及低糖度的组合诱导组培苗生根获得完整植株。本发明方法有效解决了绒毛白蜡增殖率低的问题，实验统计：试管苗的增殖率由原来最高的3.59倍提高到10倍以上，增殖系数提高2～3倍，实现了绒毛白蜡快繁增殖的目的。应用本发明方法在短时间内能获得大量的种苗，可充分满足大面积盐碱地造林的需要。

主权项

一种提高绒毛白蜡组培快繁增殖率的方法，步骤包括：(1)无菌苗建立，(2)快繁增殖；(3)组培苗生根；(4)炼苗移栽；其特征在于：步骤(1)所述无菌苗建立的方法是：选取无病虫害籽粒饱满的种子，去掉种皮，灭菌后接种到种子萌发培养基中，置于组培室，昼夜光照周期培养条件为：白天光照强度为2000～3000Lux，光照时间12～14h·d^‑1，温度25±1℃；夜间温度18±1℃；7～10d后种子萌发，获得无菌苗；其中：所述种子萌发培养基配方是：WPM+6‑BA0～0.3mg·L^‑1+蔗糖25～35g·L^‑1+琼脂4～5g·L^‑1，pH值5.8～6.0；步骤(2)所述快繁增殖的方法是：将步骤(1)获得的无菌苗剪成1～2cm长带芽茎段，转接于快繁增殖培养基中，以步骤(1)所述条件进行昼夜光照周期培养，25～30d后诱导形成丛生芽，增殖倍数8～10倍；其中：所述快繁增殖培养基是以WPM培养基为基本培养基，于基本培养基中添加苯基噻二唑基脲(TDZ)、玉米素(ZT)、6‑苄氨基腺嘌呤(6‑BA)、萘乙酸(NAA)四种植物生长调节剂制成，该快繁增殖培养基配方是：WPM+TDZ0.5～2.0mg·L^‑1+ZT1.0～2.0mg·L^‑1+6‑BA0.5～1.5mg·L^‑1+NAA0.5～1.0mg·L^‑1+25～35mg·L^‑1蔗糖+4～5mg·L^‑1琼脂，pH值5.8～6.0；步骤(3)所述组培苗生根的方法是：待步骤(2)培养的试管苗长到3～5cm时，将其切成单株，接种到生根培养基中，以步骤(1)所述条件进行昼夜光照周期培养，15～20d后获得生根植株，其生根数4～6条，根长1～3cm；其中：所述生根培养基配方是：1/2WPM+0.7～2.1mg·L^‑1IBA+0.01～0.03mg·L^‑1NAA+0.1～0.2mg/L ZT+18～25g·L^‑1蔗糖+4～5g·L^‑1琼脂，pH值5.7～5.9；上述1/2WPM是指培养基的组分中WPM大量元素减半及其余为WPM全量元素，其具体组分为：NH₄NO₃ 400mg·L^‑1，Ca(NO3)₂·4H₂O 556mg·L^‑1，K₂SO₄ 990mg·L^‑1，CaCl₂·2H₂O 96mg·L^‑1，KH₂PO4 170mg·L^‑1，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg·L^‑1，MgS()₄·7H₂O370mg·L^‑1，MnSO4·4H2O 22.4mg·L^‑1，ZnSO4·7H₂O 8.6mg·L^‑1，CuSO4·5H₂O0.25mg·L^‑1，FeSO4·7H₂O 27.8mg·L^‑1，Na₂‑EDTA 37.3mg·L^‑1，盐酸硫胺素1.0mg·L^‑1，烟酸0.5mg·L^‑1，盐酸比哆醇0.5mg·L^‑1，肌醇100mg·L^‑1，甘氨酸2.0mg·L^‑1；步骤(4)所述炼苗移栽的方法是：把步骤(3)中已生根的瓶苗转移到炼苗温室中适应1～2d，然后用清水逐棵洗去苗根部残留的培养基，并将其移栽到装有轻型基质的无纺布营养杯中，放置于遮光度60％～70％遮荫网塑料大棚内，利用自动间歇喷雾装置保持棚内空气相对湿度在80％以上，炼苗8～10d后，棚内逐渐通风，再继续培养10～12d，移栽于大田；其中：所述无纺布营养杯中的轻型基质的成分以体积比计为：蛭石∶珍珠岩∶草炭土＝2∶3∶5，且在无纺布营养杯中轻型基质上面还撒放一层厚度为1.5～2cm的细沙。