[发明专利]一种斑马鱼胚胎酒精肝检测模型及其构建方法和用途

摘要

本发明属于生物医药研究领域，具体涉及一种斑马鱼胚胎酒精肝检测模型及其构建方法和用途。本发明所述方法采用肝脏特异表达荧光蛋白的转基因斑马鱼，用于构建酒精性肝病的模型，通过分析斑马鱼肝脏外形肿大、胚胎卵黄吸收减少，以及荧光读数等信息，构建一种斑马鱼胚胎酒精肝检测模型，该模型具有观察指标简单，易于观察，可定性定量化等特点，特别适合应用于防治酒精肝药物的高通量筛选。

主权项

一种斑马鱼胚胎酒精肝高通量检测模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)选取肝脏特异表达绿色荧光的转基因成年斑马鱼进行雌雄配对，按照常规方法进行自然交配，收集肝脏特异表达绿色荧光的转基因斑马鱼鱼卵，备用；(2)将收集的鱼卵用反渗透水冲洗，随后转移至鱼水中养殖，并向所述鱼水中加入基于所述鱼水的添加量为0.2‑0.4ppm的亚甲基蓝，25‑30℃培养，并向所述鱼水中加入0.1‑0.3mM 1‑苯基‑2‑硫脲，继续培养至72hpf，随机收集已孵化的斑马鱼胚胎，分为对照组和模型组，备用；(3)在96hpf时，向所述鱼水中加入三卡因甲磺酸直至所述鱼水中三卡因甲磺酸的浓度为0.002‑0.004％，麻醉所述胚胎斑马鱼；(4)将模型组的斑马鱼胚胎转移入质量浓度为1‑3％的乙醇溶液中，在密封条件下于25‑30℃继续孵育24‑40h；另取对照组的斑马鱼胚胎转移入水中，在密封条件下于25‑30℃继续孵育24‑40h，得到斑马鱼酒精肝检测模型；(5)取模型组和对照组的斑马鱼胚胎在荧光显微镜下测定肝脏及卵黄大小，对比模型组和对照组的斑马鱼胚胎的肝脏面积、卵黄面积以及荧光表达信号强度，若所述模型组的肝脏的面积、卵黄的面积以及荧光表达信号强度均大于对照组的，则所述斑马鱼胚胎酒精肝高通量检测模型构建成功；反之，则不成功。