[发明专利]非洲猪瘟病毒VP73蛋白特异性多克隆抗体的制备方法及应用在审
| 申请号： | 201410554643.0 | 申请日： | 2014-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN104311660A | 公开（公告）日： | 2015-01-28 |
| 发明（设计）人： | 陶虹;花群义;吕建强;曹琛福;刘建利;靳雯雯;杨俊兴;张彩虹;孙洁;唐金明;廖立珊 | 申请（专利权）人： | 深圳出入境检验检疫局动植物检验检疫技术中心 |
| 主分类号： | C07K16/08 | 分类号： | C07K16/08;G01N33/569 |
| 代理公司： | 广州新诺专利商标事务所有限公司 44100 | 代理人： | 刘杉 |
| 地址： | 518045 广东省深圳市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明公开一种非洲猪瘟病毒VP73蛋白小鼠腹水多克隆抗体的制备方法，旨在提供一种腹水效价高，亲和力高，抗原用量少、操作简便的新型多克隆抗体的制备方法。所述的非洲猪瘟病毒多克隆抗体的制备包括：对ASFV VP73基因序列PCR扩增、抗原的制备、动物免疫、腹水多克隆抗体提取的步骤。本发明提供的非洲猪瘟病毒VP73蛋白多克隆抗体与常规兔源、鼠源抗血清的制备方式相比，该制备方式具有抗原用量少、操作简便,非洲猪瘟病毒VP73蛋白小鼠腹水多克隆抗体可以用于非洲猪瘟病毒VP73抗体的检测，为我国非洲猪瘟病的防控提供重要的技术手段。 | ||
| 搜索关键词： | 非洲 猪瘟 病毒 vp73 蛋白 特异性 克隆 抗体 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
一种非洲猪瘟病毒VP73蛋白的特异性多克隆抗体的制备方法，包括如下步骤：a)制备VP73蛋白重组抗原：将VP73基因序列扩增至原核表达载体GEX‑KG中，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，诱导表达获得重组蛋白抗原；b)动物免疫：取步骤a)获得的重组蛋白抗原30μg与等体积的弗氏完全佐剂充分乳化制成免疫原,选择8周龄雌性Balb/c小鼠，分别在第1、15、30天对小鼠进行第一、二、三次免疫；c)加强免疫：取步骤a)获得的重组蛋白抗原30μg作为免疫原，在步骤b)中第三次免疫后45天，对小鼠进行免疫；d)对步骤c)加强免疫7天后的小鼠，腹腔注射0.5ml降植烷，7天后，接种1×105个SP2/0细胞；e)步骤d)接种SP2/0细胞7～10天后采集腹水，腹水中含有所述非洲猪瘟病毒VP73蛋白的特异性多克隆抗体。
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