[发明专利]一种3个运动能力相关基因的PCR-LDR检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种利用LDR法同时检测3个运动机能相关基因的联合检测试剂盒，该试剂盒可在3个小时内同时检测三个运动机能相关基因中的3个热点突变，该试剂盒包括PCR扩增试剂和LDR反应试剂；所述PCR扩增试剂包括：PCR缓冲液、MgCl₂和dNTPs的反应混合物，Taq酶，超纯水，高特异性扩增ACTN3、EPO、CKMM三个基因中3个热点突变的引物混合物；所述LDR反应试剂试剂包括：PCR产物、10×连接缓冲液、LDR探针、TaqDNA连接酶等。一共包括3对PCR引物和3组检测探针。本发明以上述3个基因为检测对象，该方法灵敏度高；相对传统测序技术，本试剂盒能完成一次性获得3个关键与运动能力显著相关基因的基因型，实现了对运动能力的高通量筛查，具有经济、高效和高准确率等优势。

主权项

一种同时检测3个运动基因的PCR‑LDR检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括包装盒体(1)，PCR扩增和LDR反应试剂； 所述PCR扩增试剂分别为PCR扩增ReactionMix(2)和(3)；所述LDR反应试剂为LDR反应ProbeMix(4)和(5)； 所述3个运动能力相关基因为ACTN3C>T，CKMMA>G，EPOT>G； 实验所需模板和引物如下： 其中用于ACTN3基因目的片段长度为560bp，其引物序列如下： ACTN3F:GCCACCCACAACTTTAGGCT ACTN3R:CATATACAGATGAGCCCGAG 用于CKMM基因目的片段长度为359bp，其引物序列如下： CKMMF:GGGATGCTCAGACTCACAGA CKMMR:AACTTGAATTTAGCCCAACG 用于EPO基因目的片段长度为405bp，其引物序列如下： EPO‑F:ACTCTTGGCTTTTCTGTTTTCTGGG EPO‑R:GTGTGGCATCAGCCGAAGAGAC 用于ACTN3T>C突变基因位点检测的特异探针为： ACTN3_M:5’P‑GTCAGCCTCGGGCAGTGTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC ACTN3_C:TTTTTTTTTTCCCATGATGGCACCTCGCTCTCG ACTN3_T:TTTTTTTTTTTTTCCCATGATGGCACCTCGCTCTCA 用于CKMMA>G突变基因位点检测的特异探针为： CKMM_M:5’P‑TGGCTCCCCATTTCTCCTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC CKMM_A:TTTTTTTTTTTTTTCCAGTCCCTTACTTTCTCAAGAACCTGCCA CKMM_G:TTTTTTTTTTTTTTTTTCCAGTCCCTTACTTTCTCAAGAACCTGCCG 用于EPOT3541G突变位点检测的特异探针为： EPO_M:5’P‑CACCTTATTGACCAGCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCGCAAACCTGTACTC EPO_T:TTTTTTTTTTTTTTCTGCGGTGAGGCCTTGAATGGAGA EPO_G:TTTTTTTTTTTTTTTTTCTGCGGTGAGGCCTTGAATGGAGC。