[发明专利]一种构建重组酵母发酵生产葡萄糖二酸的方法

摘要

本发明公开了一种构建重组酵母发酵生产葡萄糖二酸的方法，属于代谢工程领域。本发明通过在酵母中表达肌醇‑1‑磷酸合成酶基因(Ino1)、肌醇加氧酶基因(MIOX)，实现葡萄糖醛酸的生成途径，同时表达来源于恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的醛酸脱氢酶(Udh)，成功构建了葡萄糖二酸的合成途径。其中，重组毕赤酵母在YPD发酵培养基中生成葡萄糖二酸40mg/L，在YPD‑MI(YPD培养基中加入60mM肌醇)发酵培养基中生成葡萄糖二酸60mg/L。本发明提出的重组酵母发酵生成葡萄糖二酸的方法，具有广阔的发展前景，为生物合成葡萄糖二酸奠定了基础。

主权项

1.一种重组酵母菌，其特征在于，所述重组酵母菌同时表达肌醇‑1‑磷酸合成酶基因Ino1、肌醇加氧酶基因MIOX、醛酸脱氢酶基因Udh；所述肌醇‑1‑磷酸合成酶基因Ino1、肌醇加氧酶基因MIOX、醛酸脱氢酶基因Udh的氨基酸序列分别是SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的序列；所述重组酵母菌的出发宿主菌为毕赤酵母；所述肌醇‑1‑磷酸合成酶基因、肌醇加氧酶基因及醛酸脱氢酶基因为整合表达；所述重组酵母菌的构建方法包括如下步骤：(1)在Udh基因前融合GAP启动子构成融合片段，连接到表达载体后转化到酵母宿主菌中，得到重组菌；(2)将MIOX基因、组成型启动子TEF、Ino1基因按顺序融合，连接到表达载体上再转化到步骤(1)得到的重组菌中。