[发明专利]一种制备河豚毒素的方法有效

专利信息
申请号: 201410573138.0 申请日: 2014-10-19
公开(公告)号: CN104370929A 公开(公告)日: 2015-02-25
发明(设计)人: 钟馨稼;刘延东 申请(专利权)人: 钟馨稼;刘延东
主分类号: C07D491/22 分类号: C07D491/22
代理公司: 深圳市中知专利商标代理有限公司 44101 代理人: 张皋翔
地址: 518106 广东省深圳市光*** 国省代码: 广东;44
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摘要: 发明提供了一种制备河豚毒素的方法,具体包括如下步骤:浸泡;沉降;絮凝;离子交换;低压柱层析;高效液相色谱柱;结晶。本发明采用的上述各步骤前后紧密相连、层层相扣,能较好的将河豚毒素与4-表河豚毒素分离开来,且使河豚毒素的收率大大提高,制备出来的河豚毒素的纯度高达99%以上。
搜索关键词: 一种 制备 河豚毒素 方法
【主权项】:
一种制备河豚毒素的方法,其特征在于,具体包括如下步骤:步骤一:浸泡将河豚鱼肝或鱼子切成条或块后,用去离子水或纯化水浸泡,得到料液,浸泡至料液不再含毒为止;步骤二:沉降将步骤一所得的料液置于6~10℃沉降放置10~12小时,分出上清液,并将沉淀物离心并过滤除渣后再与上清液混合得到澄清液;步骤三:絮凝将步骤二所得的澄清液用氨水溶液调PH至7~9,加入絮凝剂溶液调节PH至4~6,搅匀,静置沉降,然后分出上清液,并将沉淀物经过高速离心并过滤除渣后再与上清液混合;步骤四:离子交换将步骤三混合所得的料液,上离子交换柱,交换至PH6.5~7.0,交换结束后用去离子水或纯化水冲柱至澄清,然后以醋酸溶液洗脱,收集含目标产物的组分,以氨水溶液调PH至5~7,减压浓缩得到浓缩液。步骤五:低压柱层析将步骤四所得的浓缩液和干硅胶拌好,上低压硅胶柱进行分离,并加入组成为正丁醇、醋酸和水的洗脱液进行洗脱,收集含目标产物的流出液部分,过滤得到滤液,减压浓缩得到浓缩液。步骤六:高效液相色谱柱将步骤五所得浓缩液注入平衡后的高效液相色谱柱,以醋酸溶液洗脱,收集含目标产物的流出液减压浓缩,得到浓缩液。步骤七:结晶将步骤六所得的浓缩液用氨水溶液调PH至8~9,冷藏,析出结晶,滤出,用无水乙醇洗涤,常温减压干燥即得河豚毒素高纯单体结晶。
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