[发明专利]一种海洋弧菌褐藻胶裂合酶的纯化方法在审
| 申请号： | 201410584557.4 | 申请日： | 2014-10-28 |
| 公开（公告）号： | CN105624135A | 公开（公告）日： | 2016-06-01 |
| 发明（设计）人： | 于文功;韩峰;路新枝 | 申请（专利权）人： | 中国海洋大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12R1/63 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 266100 山东省青*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明属于生物技术领域，涉及一种海洋弧菌褐藻胶裂合酶的纯化方法。本发明将弧菌QY101发酵液进行离心获得上清液；上清液经超滤、离子交换层析，得到纯度75%的褐藻胶裂合酶，回收率达到45%以上。本发明的纯化方法适用于中试和产业化生产褐藻胶裂合酶，有工艺简单、容易控制、纯化效果好、回收率高、成本低的优点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 海洋 弧菌 褐藻 胶裂合酶 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种从海洋弧菌发酵液中纯化褐藻胶裂合酶的方法，其特征在于，该方法包括：（1）将弧菌QY101发酵所得的发酵液离心，弃去沉淀，保留上清液；（2）上清液用截留分子量为50‑100 kDa的超滤膜进行超滤，去除大分子蛋白，收集滤出液；然后把滤出液利用截留分子量为1‑10 kDa的超滤膜浓缩2‑10倍，收集被超滤膜截留的液体；浓缩液加入等体积的50 mmol/L磷酸盐缓冲液（pH 6.5‑7.5），再次用截留分子量为1‑10 kDa的超滤膜浓缩2‑10倍，收集被超滤膜截留的液体；（3）以平衡缓冲液(50 mmol/L磷酸盐，pH 6.5‑7.5)平衡DEAE Sepharose High Performance柱2‑10个柱体积，将上步所得浓缩液上样至层析柱；用平衡缓冲液冲洗层析柱，将未结合的蛋白去除；用洗脱缓冲液洗脱，收集洗脱液。
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