[发明专利]基因组预定区域核酸测序文库的构建方法及装置

摘要

本发明公开了基因组预定区域核酸测序文库的构建方法及装置，其中该方法包括：将基因组DNA进行片段化处理；将DNA片段进行片段选择；将经过片段选择的DNA片段依次进行去磷酸化、第一末端修复、与第一测序接头相连；利用探针对第一连接产物进行筛选；将目的片段依次进行双链环化处理、酶切处理；将酶切产物依次进行第二末端修复、第二测序接头相连和DNA双链分离处理，以便获得单链DNA，所述单链DNA构成所述基因组预定区域测序文库，其中，所述探针满足选自10个条件的至少之一。该探针对目标序列捕获特异性好、灵敏度和覆盖度高，利用该方法能够有效构建用于SNP捕获检测的测序文库。

主权项

1.一种构建基因组预定区域核酸测序文库的方法，其特征在于，包括以下步骤：将基因组DNA进行片段化处理，以便获得DNA片段；将所述DNA片段进行片段选择，以便获得200‑400bp的DNA片段；将所述经过片段选择的DNA片段依次进行去磷酸化和第一末端修复，以便获得经过第一末端修复的DNA片段；将所述经过第一末端修复的DNA片段与第一测序接头相连，以便获得第一连接产物；利用探针对所述第一连接产物进行筛选，以便获得目的片段，其中所述探针特异性识别所述基因组预定区域的至少一部分，所述基因组预定区域包含至少一个SNP位点；将所述目的片段进行双链环化处理，以便获得环状双链DNA；将所述环状双链DNA进行酶切处理，以便获得酶切产物；将所述酶切产物进行第二末端修复，以便获得第二末端修复产物；将所述第二末端修复产物与第二测序接头相连，以便获得第二连接产物；将所述第二连接产物进行DNA双链分离处理，以便获得单链DNA，所述单链DNA构成所述基因组预定区域测序文库，所述基因组预定区域测序文库适于利用CG测序平台进行测序，其中，所述探针满足下列条件：(1)所述探针乘数为2，且针对一个SNP位点，两条探针分别特异性识别所述SNP位点的上游序列和下游序列，两条探针分别特异性识别所述SNP位点的上游50bp～150bp和下游50bp～150bp之间的序列；(2)所述探针的长度为80～100bp；(3)所述基因组预定区域为非重复序列；(4)特异性识别GC含量高于0.6及低于0.3的基因组预定区域的探针，乘数大于2；(5)所述探针与目标序列的熔解温度为60‑100摄氏度；(6)所述探针不包含发夹结构；(7)所述探针与所述参考基因组上的至多2个位点匹配；(8)所述探针选择时的窗口滑动大小为10bp。