[发明专利]一种猪苓菌核多糖的提取制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种猪苓菌核多糖的制备方法猪苓菌核乙醇浸泡、蒸馏水提取后，提取液浓缩，然后加入95％‑100％的乙醇醇沉，取乙醇终体积浓度为60％的醇沉组分，先用阴离子交换柱分离提纯，梯度洗脱后再用凝胶过滤色谱柱分离，制得猪苓菌核多糖。本发明方法制得的猪苓菌核多糖为均一多糖，具有抗氧化活性，可以清除DPPH自由基，可用于制备抗氧化剂。

主权项

一种猪苓菌核多糖的制备方法，其特征在于所述的猪苓菌核多糖为均一多糖，平均分子量为290KDa，结构是以1→6连接的β‑D‑葡萄糖为主链，以1→3连接的β‑D‑葡萄糖、1→4连接的β‑D‑葡萄糖、1→3连接的β‑D‑葡萄糖醛酸、1→4连接的β‑D‑葡萄糖醛酸、末端β‑D‑葡萄糖构成的支链取代于主链的O‑3位置，其中主链上被取代的残基与未被取代的残基比为1:1；所述方法包括以下步骤：(1)干燥的猪苓菌核，经粉碎得到猪苓菌核粉末，猪苓菌核粉末用体积分数95％‑100％的乙醇充分浸泡过滤，得滤渣；(2)步骤(1)所得的滤渣加蒸馏水，90‑100℃提取2‑4h，重复提取3～4次，过滤，合并所有的上清液，所得上清液A减压浓缩至原体积的1/10，得到浓缩液A，所述蒸馏水的质量用量为猪苓菌核粉末的质量的10‑20倍；(3)向步骤(2)得到的浓缩液A中缓慢加入体积分数95％‑100％的乙醇，至乙醇终体积浓度为30％，4℃温度下静置8～12h，离心分离，得到沉淀I和上清液I，上清液I中缓慢加入体积分数95％‑100％的乙醇，至乙醇终体积浓度为60％，4℃温度下静置8～12h，离心分离，收集沉淀II，真空冷冻干燥，得到醇沉组分；(4)将步骤(3)得到的醇沉组分加蒸馏水溶解，所述蒸馏水的体积用量以醇沉组分的质量计为0.1～0.2mL/mg，离心，得上清液B，上样于阴离子交换柱，依次用水、0.1mol/L氯化钠水溶液、0.2mol/L氯化钠水溶液、0.4mol/L氯化钠水溶液进行梯度洗脱，苯酚硫酸法监测洗脱液中多糖含量，收集0.2mol/L氯化钠水溶液洗脱下来的洗脱液，浓缩至所得浓缩液B中氯化钠浓度达到饱和，将浓缩液B上样于凝胶过滤色谱柱，用蒸馏水洗脱，苯酚硫酸法检测，收集含有多糖的洗脱液，浓缩、真空冷冻干燥后制得猪苓菌核多糖。