[发明专利]一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统及应用有效

专利信息
申请号: 201410605792.5 申请日: 2014-10-31
公开(公告)号: CN105624178B 公开(公告)日: 2019-08-06
发明(设计)人: 崔宗强;张先恩;陈明海;张治平;李炜 申请(专利权)人: 中国科学院武汉病毒研究所
主分类号: C12N15/63 分类号: C12N15/63;C12N15/66;G01N21/64
代理公司: 武汉宇晨专利事务所 42001 代理人: 王敏锋
地址: 430071 湖北*** 国省代码: 湖北;42
权利要求书: 暂无信息 说明书: 暂无信息
摘要: 发明为一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统及应用,以光敏色素荧光蛋白iRFP为模板,在氨基酸97‑98位将其拆分为不发荧光的氮端和碳端片段iRN97和iRC98,当这两个片段分别与相互作用的蛋白对相融合表达时,不发荧光的两个片段就可以被拉近而产生iRFP的荧光;iRN97和iRC98分别与艾滋病毒整合酶IN及细胞蛋白P75相融合表达,通过iRN97和iRC98的荧光互补,在活细胞内对IN与p75的相互作用进行研究,当药物能够抑制该蛋白‑蛋白之间的相互作用时,iRN97和iRC98则不能被拉近,从而抑制荧光的恢复。该新系统为一种简单、有效、方便的抑制蛋白相互作用的药物的评价系统。
搜索关键词: 一种 基于 荧光 蛋白 irfp 分子 片段 互补 系统 应用
【主权项】:
1.一种基于荧光蛋白iRFP的双分子荧光片段互补系统,该系统包括载体piRN97和piRC98;所述的piRN97载体为包含有序列SEQ ID NO.2的pcDNA3.1载体;piRC98载体为包含有序列SEQ ID NO.3的pcDNA3.1载体;所述载体piRN97的制备方法,具体如下:将SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列利用双酶切位点EcoRV和XhoI,把iRN97基因插入pc DNA3.1载体的多克隆位点上,即得载体piRN97;所述载体piRC98的制备方法,具体如下:利用双酶切位点NheI和HindIII,将SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列插入到pcDNA3.1载体的多克隆位点上,即得piRC98。
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