[发明专利]一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用

摘要

本发明提供了一种检测细胞NF-κB信号通路的PCR试剂及其应用，本发明所述检测试剂包括检测CD40基因、IL10基因、CD83基因、EGFR基因等相关基因和内参ACTB基因、GAPDH基因、HPRT1基因的PCR反应引物。本发明将涉及NF-κB信号分子集中在一个平板上，通过做一次实时荧光定量PCR反应，反应细胞的生存状态，与正常的肝癌、肝细胞做对比，探讨NF-κB信号通路在肿瘤/正常细胞中的可能途径，为研究关键蛋白的调控提供最直接的证据；本发明从转录水平快速准确的找到NF-κB信号通路相关分子，为抗癌药物筛选、新靶向药物的机制探讨等提供了有力的工具。

主权项

一种检测细胞NF‑κB信号通路的PCR试剂，其特征在于它包括以下引物：(1)检测CD40基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGGGTCAAGCAGATTGCTA‑3'；5'‑CAGATGACACATTGGAGAAGA‑3'；(2)检测IL10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAAGGCGCATGTGAACTCC‑3'；5'‑ATGTCAAACTCACTCATGGCT‑3'；(3)检测CD83基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGCTGGCATGGAACGAG‑3'；5'‑GTCTTGTGAGGAGTCACTAGC‑3'；(4)检测EGFR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCACGAGTAACAAGCTCAC‑3'；5'‑TGAGGACATAACCAGCCACC‑3'；(5)检测FASLG基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTTAACAGGCAAGTCCAACTCA‑3'；5'‑GCCACCCTTCTTATACTTCACT‑3'；(6)检测IL1A基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCATGTAAGCTATGGCCCACT‑3'；5'‑TTCCCGTTGGTTGCTACTAC‑3'；(7)检测IL1B基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCGACACATGGGATAACGAGG‑3'；5'‑TTTTGCTGTGAGTCCCGGAG‑3'；(8)检测IL1R1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCCAGTTGAGTGACATTGCT‑3'；5'‑GTGATGAGGGTACTCCTTCTTT‑3'；(9)检测IL8基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGAGAGTGATTGAGAGTGGAC‑3'；5'‑ACCCTCTGCACCCAGTTTTC‑3'；(10)检测LTBR基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGTCCGACACAACCTGC‑3'；5'‑TACAGGATTGGGTCCCTCTC‑3'；(11)检测NOD1基因的的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCGACCACGTCCTGCTAT‑3'；5'‑AGGTTGGTGAACTGGAAGTG‑3'；(12)检测TLR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCAAACGTGAAGCTACAGGG‑3'；5'‑CGAACACATCGCTGACAACT‑3'；(13)检测TLR2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTCTCGGTGTCGGAATGTC‑3'；5'‑CCCGCTCACTGTAAGAAACA‑3'；(14)检测TLR3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAACACAAGCATTCGGAATCTG‑3'；5'‑AGGAATCGTTACCAACCACATT‑3'；(15)检测TLR4基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTTGATCTACCAAGCCTTGAGT‑3'；5'‑CTGGTTGTCCCAAAATCACTTT‑3'；(16)检测TLR6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAATGCAAAAACCCTTCACCT‑3'；5'‑CAAGTCGTTTCTATGTGGTTGA‑3'；(17)检测TLR9基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCCCTCATATCCCTGTCCC‑3'；5'‑TTGCCGTCCATGAATAGGAAG‑3'；(18)检测TNF基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGGCCAAGCCCTGGTATG‑3'；5'‑AGGCCAAGCCCTGGTATG‑3'。(19)检测TNFRSF1A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACGAGTGTGTCTCCTGTAGT‑3'；5'‑GAGTAGAGCTTGGACTTCCAC‑3'；(20)检测TNFRSF10A基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGGGGAGGATTGAACCAC‑3'；5'‑GACGACAAACTTGAAGGTCTT‑3'；(21)检测TNFRSF10B基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGTTGCAGCCGTAGTCTTG‑3'；5'‑CAGGTCGTTGTGAGCTTCT‑3'；(22)检测TNFSF10基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCGTGCTGATCGTGATCTTC‑3'；5'‑CTCGTTGGTAAAGTACACGTA‑3'；(23)检测BIRC2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TTCAGTGGTTCTTACTCCAGC‑3'；5'‑CTGTAGGGGTTAGTCCTCGAT‑3'；(24)检测FADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGAAGGAGAACGCAACAGT‑3'；5'‑CTGAACCTCTTGTACCAGGTC‑3'；(25)检测IRAK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGTTTCGTCACCCAAACATT‑3'；5'‑GGGCTGTACCCAGAAGGA‑3'；(26)检测IRAK2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCCACCCCAATGTCTTACC‑3'；5'‑GGGAACCATTTGCCATGTAG‑3'；(27)检测IRF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGCTACACAGTTCCAGG‑3'；5'‑TCCTCAGGTAATTTCCCTTCCT‑3'；(28)检测MYD88基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTGCTCTCAACATGCGA‑3'；5'‑TGTGTCCGCACGTTCAAGA‑3'；(29)检测RIPK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TACATGGAAAAGGCGTGATACA‑3'；5'‑GGTCTGCGATCTTAATGTGGA‑3'；(30)检测TBK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GATCACTGCCATTTAGACCC‑3'；5'‑AGGCATGTCTCCACTCCAG‑3'；(31)检测TICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGGAATCATCATCGGAACAG‑3'；5'‑GAGTGGTCTATGGCGTCCT‑3'；(32)检测TNFAIP3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAACTGGTGTCGAGAAGTCC‑3'；5'‑AAGTCTGTGTCCTGAACGC‑3'；(33)检测TRADD基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGTTTGAGTTGCATCCTAGC‑3'；5'‑CGCACTTCAGATTTCGCA‑3'；(34)检测TRAF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTCATGCTGACCGAATGTC‑3'；5'‑CCGTCACAAGTTAAGGGGAA‑3'；(35)检测TRAF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTTGAGGAAAGACCTGCGAG‑3'；5'‑CGATCATCGGAACCTGACT‑3'；(36)检测TRAF6基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGCCATGAAAAGATGCAGAGG‑3'；5'‑GCCTGGGCCAACATTCTC‑3'；(37)检测BCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACATCTACAACAACCTACGGC‑3'；5'‑GTGAGCCCGTCATAATTGC‑3'；(38)检测CHUK基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGAAGAAGTTGAACCATGCCA‑3'；5'‑CTCCAGAACAGTATTCCATTGC‑3'；(39)检测IKBKB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGCCTTTGAGTGCATCAC‑3'；5'‑GCTAACAACAATGTCCACCT‑3'；(40)检测IKBKG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCAGAGCAACCAGATTCT‑3'；5'‑CTGGCATTCCTTAGTGGCAG‑3'；(41)检测NFKBIA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCCGAGACTTTCGAGGAAATAC‑3'；5'‑CCATTGTAGTTGGTAGCCTTCA‑3'；(42)检测NFKBIE基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AATTGCTGCTTCGGAATGGA‑3'；5'‑ATGCGGGCATCTACCTGG‑3'；(43)检测NFKB1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAGCACGAATGACAGAGGC‑3'；5'‑CTTGGCGGATTAGCTCTTTT‑3'；(44)检测NFKB2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGAGAGTTGCTACAACCCA‑3'；5'‑TGTTCCACGATCACCAGGTA‑3'；(45)检测REL基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CATGGTAATTTGACGACTGCT‑3'；5'‑CTTCCCAATCGTTCAACACA‑3'；(46)检测RELA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TGGGGACTACGACCTGAATG‑3'；5'‑GGGCACGATTGTCAAAGATG‑3'；(47)检测RELB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCCGAGCCCGTCTATGACAA‑3'；5'‑GTCTTGAACACAATGGCAATC‑3'；(48)检测CCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGCCAGATGCAATCAATGCC‑3'；5'‑GGAATCCTGAACCCACTTCT‑3'；(49)检测CCL5基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAGCAGTCGTCTTTGTCAC‑3'；5'‑TCTGGGTTGGCACACACTT‑3'；(50)检测CSF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GACCTCGTGCCAAATTACATT‑3'；5'‑GGTGTCTCATAGAAAGTTCGGA‑3'；(51)检测CSF2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTGAACCTGAGTAGAGACAC‑3'；5'‑GCTGCTTGTAGTGGCTGG‑3'；(52)检测CSF3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGCTTGAGCCAACTCCATA‑3'；5'‑AACGCGGTACGACACCTC‑3'；(53)检测ICAM1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TATGAACTGAGCAATGTGCAAG‑3'；5'‑TTCCACCCGTTCTGGAGTC‑3'；(54)检测IFNA1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCTCGCCCTTTGCTTTACT‑3'；5'‑TGTGGGTCTCAGGGAGATCA‑3'；(55)检测IFNG基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CGGTAACTGACTTGAATGTCCA‑3'；5'‑CGCTTCCCTGTTTTAGCTGC‑3'；(56)检测TIMP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCACCTTATACCAGCGTTATGA‑3'；5'‑GTGTAGACGAACCGGATGTC‑3'；(57)检测LTA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCTACTTCGTCTACTCCCAGG‑3'；5'‑CCCGTGGTACATCGAGTG‑3'；(58)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCATTGACTTTTCTGTCGCC‑3'；5'‑CAAAGCAAGCCACTCTGT‑3'；(59)检测AGT基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCCAATTCAGGCCAAGACAT‑3'；5'‑GTCAAGTTTTGCAGCGACTA‑3'；(60)检测BCL2A1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTGCTACAAAATGTTGCGTTC‑3'；5'‑GCAATTTGCTGTCGTAGAAGTT‑3'；(61)检测BCL2L1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACTGAATCGGAGATGGAGACC‑3'；5'‑CAGTTCAAACTCGTCGCCT‑3'；(62)检测BIRC3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCATTGACTTTTCTGTCGCC‑3'；5'‑CAAAGCAAGCCACTCTGT‑3'；(63)检测AKT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACAAACGAGGGGAGTACATC‑3'；5'‑CCATCATTCTTGAGGAGGAAGT‑3'；(64)检测MAP3K1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TAGGGCCTAACTCTTTCCTGAT‑3'；5'‑GTTCTAGTTGAAACACCCGGA‑3'；(65)检测RAF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GTTCAGCAGTTTGGCTATCAG‑3'；5'‑ACTGTTCTTTGCTTGTTCGG‑3'；(66)检测ATF1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACAGATGGAGTACAGGGACT‑3'；5'‑ACCACCTGATTGCTGGGC‑3'；(67)检测EGR1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCCCTCTGTCTACTATTAAGGC‑3'；5'‑GGGACTGGTAGCTGGTATTG‑3'；(68)检测ELK1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATCGGAAGAGCTTAATGTGGAG‑3'；5'‑TTGGTGGTTTCTGGCACAA‑3'；(69)检测FOS基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACTCCAAGCGGAGACAGAC‑3'；5'‑GGTCATCAGGGATCTTGCAG‑3'；(70)检测JUN基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCAAGTGCCGAAAAAGGAAG‑3'；5'‑GAGTTCTGAGCTTTCAAGGT‑3'；(71)检测STAT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GGCTGAATTTCGGCACCT‑3'；5'‑AGTAACGATGAGAGGACCCT‑3'；(72)检测CARD11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ACCTTCCAGGAGCGGTACTA‑3'；5'‑TAGCGCATGGCTAAGTTGTA‑3'；(73)检测CASP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CCAATAATGGACAAGTCAAGCC‑3'；5'‑CTGTACCCCAGATTTTGTAGCA‑3'；(74)检测CASP8基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TCATGGACCACAGTAACATGGA‑3'；5'‑AGTGAACTGAGATGTCAGCTCAT‑3'；(75)检测CFLAR基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGTGAGGCGATTTGACCTG‑3'；5'‑TCCGAAACAAGGTGAGGGTT‑3'；(76)检测HMOX1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AGACTGCGTTCCTGCTCAAC‑3'；5'‑AAGCCCTACAGCAACTGTCG‑3'；(77)检测MALT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GAGAAGTGTTGATGGCGTCT‑3'；5'‑TAGTGAGGAATAGGGCTTCCA‑3'；(78)检测PSIP1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAACAGGGGTTACTTCAACCTC‑3'；5'‑GCCTTTCAGCATATTCCTTCT‑3'；(79)检测RHOA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑ATTGGCGCTTTTGGGTACAT‑3'；5'‑GCAGCTCTCGTAGCCATTTC‑3'；(80)检测CCL20基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTGTACCAAGAGTTTGCTC‑3'；5'‑GCACACAGACAACTTTTTCTTT‑3'；(81)检测CXCL2基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CATCGCCCATGGTTAAGAAAAT‑3'；5'‑ATTGGTGGCTGTTCCTGAAGGA‑3'；(82)检测CXCL3基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CAAACCGAAGTCATAGCCAC‑3'；5'‑GCTCCCCTTGTTCAGTATCT‑3'；(83)检测STX11基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TAAGTGGGACGTGTTTTCCG‑3'；5'‑TCGATGACGTTCAGGGTGT‑3'；(84)检测TIFA基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑TACAGGTGCATGGTCAGATTCG‑3'；5'‑CTGTCGGAGAACTGCTTTGG‑3'；(85)检测GAPDH基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑CTGCCACCCAGAAGACT‑3'；5'‑CTCAGTGTAGCCCAGGAT‑3'；(86)检测ACTB基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑GCTACAGCTTCACCACCAC‑3'；5'‑ACTTGCGCTCAGGAGGAGC‑3'；(87)检测HPRT1基因的PCR反应引物，其引物序列如下：5'‑AAAAGGACCCCACGAAGTGT‑3'；5'‑GTCAAGGGCATATCCTACAACA‑3'。